实验四果蝇的形态和生活史（设计型实验）观察3.ppt

实验四 果蝇的形态和生活史(设计型实验)观察 * 一、实验目的： 三、实验材料： 四、操作步骤： 五、结果分析： 二、实验原理： 一、实验目的： 1. 掌握培养果蝇的基本程序; 2. 了解果蝇生活史中各个阶段的发育时间及形态特征; 3. 区别黑腹果蝇几种常见突变型的主要性状 4. 观察不同果蝇种类的生活史。 二、实验原理： 果蝇(Fruit fly)为双翅目昆虫,全世界约有4000种左右,其中,黑蝮果蝇(Drosophila melanogaster)由于容易饲养、繁殖力强、世代周期短以及众多的突变性状,成为遗传学研究的极好材料和超级模式生物,为遗传学和分子生物学的发展作出了巨大的贡献,推动了人类基因结构和功能的研究。 果蝇的优点：形体小，生长迅速，繁殖率高，饲养方便，世代周期短（12天可繁殖一代），突变性状多，染色体数目少，基因组小，实验处理方便，容易重复实验，便于观察和分析。 三、实验材料： 解剖镜 培养瓶 粘贴标签 麻醉瓶 装有乙醚的滴瓶 滴管 解剂针或毛刷 70%的酒精 麻醉皿（铺有吸水纸的玻璃皿） 黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)野生型(红眼、灰身、长翅、直刚毛); 未知果蝇1; 未知果蝇2; 未知果蝇3; 未知果蝇4 四、操作步骤： I. 培养基的配制: 目前，已经发展了多种果蝇的培养基。可能使用最简单方便的是“快速培养基”只需加水就可以配成可使用的培养基，不需加热，不过，一些工作者建议加5滴5%的丙酸以防霉菌，尽管方便，但大量使用时会显得非常昂贵。 Demerec 和 kanfmann的果蝇指南有一些不同的培养基配方，另一个有用的培养基要归功于加利福利亚技术研究所的C.B .Bridges ,它的配料如下: 20g琼脂 200g玉米粉 145ml 蔗糖汁 (Karo Syrup)或红糖 145ml糖密(Br’er Rabbit Molasses ) 2400ml 蒸馏水 4.5g Dowicil-200溶于15ml蒸馏水 四、操作步骤： 方案1 首先加热溶解琼脂于1000ml蒸馏水中，然后再加入1000ml蒸馏水。小心地将混合液加热到沸腾。在加玉米粉之前，先将玉米粉溶于400ml未加热的蒸馏水中（这样做可以防止玉米粉在热的琼脂悬液中形成团块）。加玉米糊到混合液中，搅拌阻止培养基凝结，然后加入蔗糖汁和糖密，加热15分钟，融解Dowicil-200GF 15ml蒸馏水中，然后将其加入到主混合液中搅拌均匀。不要让玉米粉沉淀。 将培养基倒入于净的玻璃瓶。这些瓶子可以是各种型号的,但以4盎司的广口瓶和半磅的牛奶瓶为佳。将培养基转移到大烧杯中，这样便于倒液。每支瓶子大约盛装1英寸深的培养基。注意不要让培养基贴着瓶颈流入。 四、操作步骤： 在培养基中插入消毒过的吸水纸，使用的纸大约1英寸宽，插入后确保低于瓶颈0.5英寸。这为幼虫化蛹提供了一个干燥的场所。用纱布包裹的棉花作瓶塞，也可以用泡沫塑料作瓶塞 。 瓶子塞好后，在高压灭菌锅中20镑压力消毒20分钟。其它处理果蝇的用品也可同时消毒。 加热后冷却时，水蒸汽会在瓶内冷凝。为了使水分蒸发，应将试剂瓶置放在通风良好的房间48小时。在放入果蝇前，应先加入少量干燥的酵母菌，这种酵母会成长作为果蝇幼虫的食物。 四、操作步骤： 方案2 先将苯甲酸溶入5ml 95% 酒精中溶解备用,同时取适量水将玉米粉调成糊状放置; 将琼脂放入总量1/4水中加热溶解于60℃保温,再将余下的水倒入玉米糊中加热煮熟,加入红糖煮透倒入琼脂溶液充分混合,去火,盖上盖闷10min,待培养基冷却至60℃时如入苯甲酸,倒入培养瓶(培养瓶事先在120℃干热灭菌1h)盖上瓶塞,放置一天后使用。 四、操作步骤： Ⅱ. 黑腹果蝇的发育及生活史观察 果蝇的卵产在培养基的表面或附近管壁上，孵化一天后，产生微小的白色幼虫，它们以酵母细胞为食。幼虫要7天的时间长大。然后它们爬到瓶壁上或吸水纸上化蛹。蛹化3天后，成虫出现。在25℃,整个生活周期的完成约需10天(图3.1) 四、操作步骤： 生活周期 四、操作步骤： Ⅲ. 果蝇处理 1.滴几滴乙醚在麻醉瓶内的吸水纸上。 2.轻摇培养瓶这样果蝇会掉在瓶底。 3.移走培养瓶的瓶塞，迅速对准麻醉瓶瓶口，将培养瓶倒转，使果蝇进入麻醉瓶。 4.在它们停止移动后再麻醉30秒。如果要进行进一步的杂交实验，注意不要过度麻醉。如果在麻醉瓶里停留的时间过长，则果蝇会死亡。过度麻醉的果蝇翅膀外展45°