获得重构基因的简捷方法—— 重叠延伸P C R.pdfVIP

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2018-06-04 发布于河南
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获得重构基因的简捷方法—— 重叠延伸P C R

第 30 卷第 5期吉林大学学报( 医学版 ) V ol.30 N o.5 2004 年 9 月 Journalof Jilin U niversity (M edicine Edition) Sept. 2004 713 [文章编号] 1671-587Ⅹ(2004)05-0713-04 获得重构基因的简捷方法——重叠延伸 PCR 1 1* 1 2 1 刘玲丽 , 谭岩 , 刘力华 , 张琨 , 时阳 , 1 1 1 1 1 许淑芬 , 方艳秋 , 段秀梅 , 姜艳芳 , 王晓祺 (1. 吉林大学第一医院中心实验室, 吉林长春 130021; 2. 吉林省疾病预防控制中心, 吉林长春 130061) [摘要] 目的: 构建 - 信号肽序列与白细胞介素 18 ( -18) 成熟肽的重组嵌合分子。方法: 从 / 鼠基 IFN β IL BA LB c 因组 DN A 扩增 IFN -β信号肽序列; 由小鼠 Pro-IL -18 真核表达质粒获得 IL -18 成熟肽序列; 以非对称 PC R 技术得到 - 信号肽编码区的反义链和 -18 成熟肽正链; 采用重叠延伸 ( - ) 产生具有 - 信号肽与 -18 成 IFN β IL PC R SOE PCR IFN β IL 熟肽的嵌合编码序列; 定向连方式构建嵌合 IL-18的表达质粒并测序。结果: 连续胶 PA G E 表明非对称 PCR 可分别扩增出两个靶序列的特异性单链, 大小符合预期。 - 信号肽对称产物与 -18 非对称产物混合作为模板, IFN β PC R IL PCR 进行重叠延伸;电泳分析可见清晰的嵌合片段;测序显示重组质粒的表达框由两个设计的靶序列构成,且无移码。结论: 重叠延伸 PCR 是一种获得重构基因的简捷方法。 [关键词] 嵌合白细胞介素 18; 重叠延伸PC R ; 非对称PC R [中图分类号] Q 784 [文献标识码] A Splicing overlap extension by PCR : a convenient m ethod to obtain recom binant gene