高通量血清NMR代谢组学进行有效益全面研究全身代谢.pptVIP

High-throughput serum NMR metabonomics for cost-effective holisticstudies on systemic metabolism北京化工大学 李萌 Analyst Impact Factor=3.913(2011), (5 Year)IF=3.843 Introduction 代谢组学是一个组学方法识别和监测代谢表型有关各种协同因素例如环境，生活方式，饮食习惯以及潜在的病理生理的过程。 关键的实验分析技术：MS和NMR 质子核磁共振分析重复性高，并提供了非选择性方式来具体的量化数据。因此，它是适合探测连续的有关潜在全身效应的多代谢变化，例如动脉粥样硬化病理生理学的疾病和健康间的灰色区域。 Introduction 对此，单独的生物标志物，目前确认在描述疾病的复杂分子基础中失败 我们通过高通量的分析和先进的计算方法来提供一个代谢组学的有效解决方案。 本文的高通量的血清代谢组学来表征个人全身代谢表型 血清中的各种分子和多重环境在一定程度上阻碍了分子的识别和量化，因此采用了两种分子窗口——LIPO和LMWM Introduction LIPO窗口：代表传统的水压血清氢谱，主要的信息在脂蛋白脂质及子类。 LMWM窗口：用大多数广泛的信号获得的来表征LIPO窗口不可见的，并且低分子代谢物的检测得到了很大改善。 草案从建立优化到测试在实验室用了大约6个月。此外，所有检测和优化用了12000流行病学样本。 Materials 613例病人糖尿病并发症和早产死亡的疾病连续和早期的老年痴呆症 4407例年轻芬兰人的心血管疾病风险研究 代谢综合征MetS：一种合并有高血压以及葡萄糖与脂质代谢异常的综合征。是导致糖尿病(DM)心脑血管疾病(CVD)的危险因素，其集簇发生可能与胰岛素抵抗(IR)有关。 NCEP（国家胆固醇教育组织），IDF（国际糖尿病联合会），EGIR（胰岛素抵抗欧洲研究小组） 1H NMR spectroscopy – instrumentation 1H NMR spectroscopy – instrumentation 温度的稳定性是高通量的关键因素 预热装置：将样品预热至高37℃于0.5℃，考虑到将样品转移至NMR超导磁体的探头中的损失，来保持温度稳定。 开始实际测量之前，（预热）样本在探头中保持闲置至少为2min来保持温度稳定。 Sample storage and preparation The NMR spectral characteristics and the metabolic contents of the two molecular windows – LIPO and LMWM. Statistical colourings of selected clinical and biochemical variables in the SOM analysis of the combined LIPO and LMWMmolecular windows RSC:英国皇家化学学会（Royal Society of Chemistry) 150-180样品/天，50000样品/年 图1：a:Gilson 215液体处理装置 b:96试管架 c:SampleJet 样品交换器，良好的放置能力，包括一个样品冷却装置和样品预热装置 实验在NMR超导磁体的探头中进行 500.36MHz的Bruker AVANCE Ⅲ -80°C储存 4°C冰箱过夜解冻 混合，在3400*g离心机中去除沉淀 分装300微升，加入缓冲液 （含TSP内标） Gilson215液体加样至 5mm核磁管中 NMR Automatic SOM：self-orgainsing map 自组织映射分析：根据数据驱动相似性准则对输入数据进行分析，是一种无监督的识别技术。 self-organized learning：通过自动寻找样本中的内在规律和本质属性，自组织、自适应地改变网络参数与结构。 4407例血清，对应8814例光谱，年轻芬兰人心血管疾病风险研究 正六边形单位代表一个样本，颜色可视化。