eml4alk融合基因在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义word格式论文.docx

so it indicated EML4-ALK to be unique subtype of NSCLC and provided reference for ALK inhibitor in the individual treatment of NSCLC.2 We successfully detected the EML4-ALK fusion gene by Enrich mutation-PCR assay, indicating it would be a novel effective measurement to examine the gene.Key words: NSCLC ; EML4-ALK; Enrich Mutation-PCR; IHC ; Clinical Features前言肺癌是当今世界发病率最高的恶性肿瘤，其病死率居癌症首位，传统的化疗和 放疗缺乏特异性，对正常的组织存在着一定程度的毒副作用，第三代含铂化疗对其 5 年生存率仅能提高 5%，而且 5 年生存率也仅为 15.7%[1-3]。虽然近年来肺癌治疗领 域取得了较大的进展，多学科综合治疗和靶向治疗成为肺癌的治疗方向，但肺癌是 多因素，多基因相关性疾病，具有多个突变的基因亚型[4]，因此，积极探索与肺癌 化疗或靶向治疗相关的基因是亟须要解决的问题, 选择肺癌细胞特异的分子靶点进 行治疗，既能提高肺癌患者中位生存期，改善预后，又可以减轻对正常组织或细胞 的毒副作用。2007 年，Soda 发现的 EML4-ALK 融合基因为 NSCLC 的个体化治疗开 启了一扇希望之窗。EML4-ALK 融合基因是由第 2 号染色体短臂插入引起，是由 12 个碱基分隔开的序列 EML4 和 ALK 倒位融合而成，其 ALK 的酪氨酸激酶区是其致 瘤性的关键结构。在此后的细胞及动物模型的研究中发现含有该融合基因的肿瘤增 长迅速，表明该融合基因具有恶性转化、致瘤能力[5、6]。目前进行的临床试验中针对 此靶点的药物 crizotinib 取得很好的临床效果[7]，因此，在继 EGFR 成为 NSCLC 靶 点之后，EML4-ALK 使肺癌基因靶向治疗有了新的突破。该基因在肺癌的个体检测 中发现具有与 EGFR 相似的临床特征，但在特罗凯的靶向治疗中没有明显获益，因 此，分析其可能独特的临床特征、相关性因素为肺癌患者的个体化治疗及靶向治疗 提供依据。鉴于 EML4-ALK 融合基因可能在非小细胞肺癌的分层检测中占据重要地 位，因此，检测该融合基因成为一个新的课题。既往研究基于新鲜手术组织标本开 展该融合基因的检测，但在临床应用中往往多为回顾性分析，难以同时分层检测， 手术标本难以取得，因此，本实验应用蜡块组织应用突变体富集 qPCR 法联合免疫 组化法检测该融合基因。考虑 EML4-ALK 融合基因存在 11 种变异体，因此应用 TaqMan 探针检测基因突变（SNP），从而分析其临床特征和相关因素。材料和方法一、标本本实验所有组织病理标本均选于..................第一附属医院 2010 年1 月至 2010 年 6 月的 220 例连续的手术切除或活检标本，其剔除了肿瘤组织过少 不能满足实验的蜡块标本。所有标本均经病理明确诊断为非小细胞肺癌，并依据 WHO 病理类型分型[8]。有完整的临床资料，术前均未接受放疗和化疗。其中肺鳞 癌组织 92 例，腺癌 128 例（包括细支气管肺泡腺癌 12 例），对应的癌旁正常肺组织 20 例(距离肿瘤组织边缘 5cm 以上)作为对照。男性 144 例，女性 76 例；年 龄为 31～86 岁，中位年龄为 60 岁；按照非小细胞肺癌的分化程度病理学分级： 高分化 76 例，中分化 124 例，低分化 20 例；根据国际抗癌联盟（UICC）2009 年修改的非小细胞肺癌新 TNM 分期标准进行临床分期：Ⅰa 期 2 例，Ⅰb 期 26 例，Ⅱa 期 42 例，Ⅱb 期 32 例，Ⅲa 期 42 例，ⅢA 期 14 例， Ⅳ期 62 例。二、实验试剂与仪器一）实验试剂1 免疫组化主要试剂(1)ALK 抗体（D5F3 兔来源单克隆抗体）美国 CST 公司馈赠(2) EliVisionTM plus-免疫组化试剂盒福州迈新生物技术开发有限公司；(3) 正常山羊血清上海恒远生物科技有限公司(4)液体 DAB 酶底物显色试剂盒福州迈新生物技术开发有限公司；DAB-solution A(20×)3mlDAB-solution B(20×)3mlDAB-solution C(20×)3ml(5)多聚—L—赖氨酸武汉博士德生物技术有限公司；(6)无水乙醇上海苏懿化学试剂有限公司；(7)二甲苯中国安徽省蚌埠市新科电