抽气换气厌氧罐法.ppt

抽气换气厌氧罐法 祁红兵 原理 通过真空泵将干燥器中的空气抽出，充入混合气（H2∶N2∶CO2为1：1：8），如此三次，可将干燥器中的氧气降至5％以下，放入的保险粉试剂可与剩余的微量氧发生反应，生成CO2，从而造成干燥器的厌氧环境。 连接 保险粉吸氧剂的制备 原理：该法使用的二亚硫酸钠(Na2S2O4)是一种较强的还原剂，遇水后容易氧化，当它与碳酸氢钠混合时，能产生氢气，消耗氧气，放出二氧化碳。能迅速的使罐内保持厌氧状态，并产生厌氧菌所需的二氧化碳。 放置保险粉 试剂：二亚硫酸钠、碳酸氢钠、无水硫酸钠。将亚硫酸钠和碳酸氢钠混匀（1：2），用时按每升4克称取均匀干粉，加入0.5毫升水，放入容器内，置于接种平皿厌氧罐顶部。 厌氧指示剂的配制 吸取0.1 mol／L氢氧化钠6 mL，加水稀释至100 mL;吸取0.5％亚甲蓝水溶液3 mL，加水稀释至100 mL；称取葡萄糖6 g，加水溶解稀释至100mL。 将以上3种液体等量混合，取2 mL加入试管内煮沸，使之呈无色，然后立即放入厌氧罐内。 厌氧指示剂的放置 将厌氧指示剂垂直插在隔板空中，操作过程中尽量保持无色 准备 打开干燥器旋钮 三通阀三个方向通气（中间指向北方） 插上真空泵电源 抽气 抽气约5分钟，真空泵指数约在－0.1时（此时厌氧指示剂无色），扭转三通阀关闭抽真空方向（中间指向南方），拔下真空泵电源 关闭 轻转旋钮（逆时针）混合气钢瓶阀门，缓慢充气至压力为0，关闭钢瓶阀门 （顺时针） 换气 插上真空泵电源，扭转三通阀使之三个方向通气（中间指向北方） 如此3－4次抽气换气 关闭干燥器阀门，室温下放置1－2小时，检查厌氧指示剂 培养 将干燥器放入细菌培养箱37℃下培养2天 培养过程中检查厌氧指示剂 注意事项 禁止真空泵空转，防止损坏真空泵； 禁止快速充气放气，以免冲开干燥器盖及损坏压力表； 前期动作尽量快速，减少样品在空气中的停留时间； 最后停止充气时，压力要略小于0，可防止细菌在培养时产生气体，冲开干燥器盖。 谢谢 * * 自制抽气换气式厌氧罐 1：厌氧培养罐 2：混合气体（CO2：H2：N2=1：1：8）钢瓶：3：压力表 4：三通阀 5：缓冲瓶 6：真空泵 7：保险粉 压力表 混合气 钢瓶 三通阀 厌氧罐 真空泵 缓冲瓶 A B C D 检查各部件是否连接牢固，连接处涂抹凡士林 *