微生物实验一-微生物染色法及光学显微镜使用.pptVIP

霍乱弧菌：主要通过污染的水源或饮食物经口传染。进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的粘液层，可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上，在肠粘膜表面迅速繁殖，产生霍乱肠毒素，此毒素作用于粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌，从而患者出现上吐下泻， * * 实验内容 一、显微镜油镜的使用与保护 二、细菌基本形态与特殊结构的观察（标本） 三、细菌的涂片制作和革兰染色法（示教） 目的要求 熟悉显微镜油镜的使用与保护 了解光学显微镜的结构与使用 掌握细菌基本形态的观察 掌握细菌特殊结构的观察及其意义 掌握细菌的涂片和革兰氏染色法 一、显微镜油镜的使用与保护 1.光学显微镜结构 2.显微镜油镜的识别 3.显微镜油镜的原理 4.镜下观察内容 5.显微镜油镜的使用方法 6.显微镜油镜的保护 油镜的识别： 刻有“100X”或“OIL”字样 有一圈白线作为标记 物镜上标有放大倍数、数值孔径（NA）、工作距离、要求盖玻片的厚度 物 镜 介质折射率↑ → 数值孔径NA ↑ → 显微镜分辨率↑ 镜下观察内容 染色性 个体形态 群体排列 二、细菌基本形态与特殊结构的观察 1.细菌的基本形态 球菌 杆菌 螺形菌 螺菌 弧菌 球菌 个体形态 群体形态 圆球形 近似球形：肾形、矛头形等 双球菌：脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌 链球菌：溶血性链球菌、肺炎链球菌 葡萄球菌：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌 其他：四联球菌、八叠球菌 形态 杆菌 群体形态 单个分散不规则存在（大肠杆菌） 链状排列——链杆菌（炭疽芽胞杆菌） 平齐、钝圆、尖细或膨大成棒状 个体形态 形态 螺旋菌 霍乱弧菌。 幽门螺杆菌。 弧菌 螺菌 螺旋菌 菌体细长并且形成弯曲 细菌的基本形态（标本） 2.细菌的特殊结构 荚膜：肺炎链球菌 鞭毛：变形杆菌 芽胞：破伤风梭菌 （1）荚膜： 糖被的一种，包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的胶状物质。 * 粘液层 菌胶团 荚膜 * 功能 ①保护细菌免受干燥的影响； ②贮藏养料，以备营养缺乏时重新利用； ③透性屏障和离子交换系统； ④表面附着作用； ⑤细菌间的信息识别作用； ⑥堆积代谢废物。 细菌的特殊结构（标本） 荚膜：肺炎链球菌（吕氏美兰染色法） （2）鞭毛：具有推动细菌运动功能， “运动器官”。 细菌的特殊结构（标本） 鞭毛：变形杆菌（镀银染色法） （3）芽孢： 某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体，称为芽孢。 * 芽孢有较强的抗热，抗辐射，抗化学物和抗静水压的能力。 是否能消灭芽孢是衡量各种消毒灭菌手段的最重要的指标。 芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营 养态细胞；产芽孢细菌的保藏多用其芽孢。 产芽孢的细菌多为G+，杆菌，也有一些球菌。芽孢的有无、形态、大小和着生位置是细菌分类和鉴定中的重要指标。 细菌的特殊结构（标本） 芽胞：破伤风梭菌（负染色法） 三、细菌的涂片制作和革兰染色法 1、细菌的涂片制作 菌种：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌18-24h 营养琼脂斜面培养物 器材及试剂：载玻片、接种环、酒精 灯及无菌生理盐水、结晶紫、卢戈氏 碘液、95%乙醇、石炭酸复红。 方法： （1）.涂片 （2）.干燥 （3）.固定 2、革兰染色法 革兰染色液：结晶紫染液、碘液、95%酒精、蕃红。 方法： 初染 媒染 脱色 复染 1min 1min 30s 30s-1min Gram 金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌 ◆结晶紫—初染 ◆碘液--媒染 ◆乙醇--脱色 ◆蕃红--复染 简单染色法 革兰氏染色法 革兰染色法原理： * G-细菌的细胞壁厚度较G+细菌薄，肽聚糖含量少且交联程度低，脂含量丰富，脱色后通透性增加，易复染。 实验报告：细菌的涂片制作和革兰染色法要求：1、实验报告纸2、实验标题、目的、原理、材料、方法、 结果（个体、群体形态图）以及讨论（实验情况、 成功失败、原因分析、经验总结）。 霍乱弧菌：主要通过污染的水源或饮食物经口传染。进入小肠后，依靠鞭毛的运动，穿过粘膜表面的粘液层，可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上，在肠粘膜表面迅速繁殖，产生霍乱肠毒素，此毒素作用于粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌，从而患者出现上吐下泻， * *