复件 基础毒理学.ppt

(三) 致突变物破坏碱基的化学结构 有些化学物可对碱基产生氧化作用，从而破坏或改变碱基的结构，有时还引起链断裂。 (四) 平面大分子嵌入DNA链 有些大分子能以静电吸附形式嵌入DNA单链的碱基之间或DNA双螺旋结构的相邻多核苷酸链之间，称为嵌入剂。 二、不以DNA 为靶的间接诱变 化学物的间接诱变可能是通过对纺锤体作用或干扰与DNA合成和修复有关的酶系统。 (一) 纺锤体抑制 一些化学物能作用于纺锤体，中心粒或其他核内细胞器，从而干扰有丝分裂过程。（干扰剂）。完全抑制时细胞分裂完全抑制，细胞停滞于分裂中期。 (二) 对酶促过程的作用 对DNA合成和复制有关的酶系统作用也可间接影响遗传物质。 一些氨基酸类似物可使与DNA合成有关的酶系统遭受破坏从而诱发突变，脱氧核糖核苷三磷酸在DNA合成时的不平衡也可诱发突变。 铍和锰除可直接与DNA相互作用外，还可与酶促防错修复系统相作用而产生突变。 三、突变小结 三、突变小节 第三节 化学致突变物的检测 一、致突变试验 (一) 基因突变试验 1.沙门氏菌回复突变试验（ Ames试验） 检测受试物诱发鼠伤寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株(his-)回复突变成野生型(his+)的能力。 试验菌株都有组氨酸突变(his-)，不能自行合成组氨酸，在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长，回复突变成野生型后能自行合成组氨酸，可在最低营养平皿上生长成可见菌落。 计数最低营养平皿上的回变菌落数来判定受试物是否有致突变性。交联剂较敏感。 2.哺乳动物细胞基因突变试验 常用的测试系统有小鼠淋巴瘤L5178Y细胞，中国仓鼠肺V79细胞和卵巢CHO细胞的三个基因位点的突变，即次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+／K+ATP酶(OUA)位点。 (二) 染色体畸变试验 1.染色体分析 观察染色体形态结构和数目改变称为染色体分析。在国外常称为细胞遗传学检验，但这一名称有时广义地包括微核试验和SCE试验，因为这两个试验同样也是在显微镜下观察细胞染色体的改变。 对于结构畸变，一般只观察到裂隙、断裂、断片、微小体、染色体环、粉碎、双或多着丝粒染色体和射体。对于缺失，除染色单体缺失外，需作核型分析。即染色体摄影拍片后，再排列进行细微观察或用电子计算机进行图象分析。 2.微核试验 经致突变物作用后，染色体无着丝点断片或因纺锤体受损伤而丢失的整个染色体在细胞分裂的后期仍留在子细胞的胞质内，成为一个或几个规则的次核，称为微核。 常用啮齿类动物骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验。PCE是红细胞成熟的一个阶段，此时红细胞的主核已排出，微核容易辩认。 (三) DNA损伤试验 1.姐妹染色单体交换(SCE)试验 SCE是染色体同源座位上DNA复制产物的相互交换，SCE可能与DNA的断裂和重接有关(DNA损伤)。 2.程序外DNA合成试验 基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外，故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。 一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝细胞等不处于正在增殖的细胞较为方便。 二、试验结果评定 在评定阳性或阴性之前，应首先检查实验的质量控制情况。致突变试验的质量控制是通过： ① 盲法观察：盲法观察是观察人员不了解所观察的标本的染毒剂量或组别，可免除观察人员对实验数据产生主观影响。 ② 阴性对照：阴性对照不加受试物的空白对照，有时则是加入为了溶解受试物所用溶剂的溶剂对照。 ?阳性对照：加入已知突变物的对照，对于体外试验应包括需活化的和不需活化的两种已知致突变物。 空白对照应和溶剂对照的结果一致，如有显著差异则可能表明有实验误差，如溶剂对照结果显著高于空白对照则可能溶剂具有致突变性。 阳性结果：应当具有剂量反应关系，并在一组或多组的观察值与阴性对照之间有显著差异。 阴性结果判定条件： ① 最高剂量应包括受试物溶解度许可或灌胃量许可的最大剂量。如该剂量毒性很大，则体内试验和细菌试验应为最大耐受量。使用哺乳动物细胞进行体外试验，常选LD50或LD80为最大剂量。在细菌试验中往往以5mg/皿作为最高剂量。 ② 各剂量的组间差距不应过大，