聂剑初 吴国利 生物化学简明教程 第一章 蛋白质的化学.ppt

蛋白质化学 本章内容 1、蛋白质的生物功能 2、蛋白质的分子组成 3、蛋白质的分子结构 4、蛋白质结构与功能的关系 5、蛋白质的理化性质 6、蛋白质的分离纯化技术 第一节  概 述 一、什么是蛋白质? 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids）通过肽键(peptide bond)相连形成的有特定空间结构及生物学功能的生物大分子。 蛋白质是生命活动的物质基础，是含量最丰富的生物大分子，具有多种生物学功能又称功能分子。 二、蛋白质在生命中的重要性 1、蛋白质是生物体的主要有机组成成分 分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。 含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45％，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80％。 2.蛋白质是一种生物功能的主要体现者，它参与了几乎所有的生命活动过程 1）催化作用：酶 2）调节作用：激素、活性肽、生长因子 3）免疫作用：免疫球蛋白 4）物质的转运和存储：血红蛋白、清蛋白 5）运动与支持作用：骨骼肌、平滑肌 6）参与细胞间信息传递：受体 7）凝血作用：凝血因子 3. 氧化供能 蛋白质元素组成的特点 蛋白质的含氮量平均为16％。 通过样品含氮量计算蛋白质含量的公式： 蛋白质含量 ( g % ) = 含氮量( g % ) × 6.25  一、氨基酸-组成蛋白质的基本单位 1、氨基酸是蛋白质的基本组成单位。 2、组成人体蛋白质的氨基酸有20种。 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-?-氨基酸（甘氨酸除外）。 氨基酸的结构通式 氨基酸的结构特点 均为α-氨基酸（除Pro） 均为L-氨基酸（除Gly） 同一碳原子上连有羧基、氨基和H 不同点为侧链R基团不同 （二）氨基酸的分类 　 习惯分类方法 芳香族氨基酸：Trp、Tyr、Phe 含羟基氨基酸：Ser、Thr、Tyr 含硫氨基酸：Cys、Met 杂环族氨基酸：His 杂环族亚氨基酸：Pro 支链氨基酸：Val、Leu、Ile 　 几种特殊氨基酸 Gly：无手性碳原子。 Pro：为环状亚氨基酸。 Cys：可形成二硫键。 （三）人体所需的八种必需氨基酸 二、氨基酸的重要理化性质 1. 两性解离及等电点 2. 紫外吸收 3. 氨基酸的化学反应 氨基酸的等电点的计算 对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 硷性氨基酸：pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2 氨基酸的重要的理化性质 2. 紫外吸收 Tyr、Phe、Trp的R基含有共轭双键，在220-300nm近紫外区有吸收。 氨基酸的重要的理化性质 氨基酸的重要的理化性质 3. 氨基酸化学反应-茚三酮反应 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.在常温，中性条件，甲醛与α- NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。 应用：氨基酸定量分析—甲醛滴定法（间接滴定） A.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。 B.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。 C.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1） D.简单快速，一般用于测定蛋白质的水解速度。 与2,4-二硝基氟苯（DNFB）反应 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 A.虽然多肽侧链上的ε- NH2、酚羟基也能与DNFB反应，但其生成物，容易与α- DNP氨基酸区分和分离 这个反应同样是用来分析肽链的N-末端或蛋白质N-末端的重要方法之一。较上一个反应的优点在于形成PTC-蛋白质或PTC-多肽后，进行酸性水解时只释放出N-端的PTH-氨基酸。“多肽顺序自动分析仪”的工作原理就是此反应。 三、氨基酸的制备 （1）水解蛋白法 1.酸水解 用6MHCl或4MH2SO4，105℃回流20小时即可完全水解。酸水解不引起氨基酸的消旋，但色氨酸完全被破坏，丝氨酸和苏氨酸部分破坏，天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解。 2.碱水解 用5MNaOH，水解10－20小时可水解完全。碱水解使氨基酸消旋，许多氨基酸被破坏，但色氨酸不被破坏。常用于测定色氨酸含量。可加入淀粉以防止氧化。 3.酶水解 酶水解既不破坏氨基酸，也不引起消旋。但酶水解时间长，反应不完全。一般用于部分水解，若要完全水解，需要用多种酶协同作用。 （2）