第六章基因工程制药工艺-2.pptVIP

生物制药工程 主讲教师：杜秉海 教授 刘 凯 讲师 山东农业大学生命科学学院微生物系 第六章 基因工程制药工艺 6.1 基因工程制药微生物表达系统 6.2基因工程大肠杆菌的构建 6.3基因工程菌的发酵培养与控制 基因工程技术—基因重组示意图 DNA片段酶切、连接、形成重组DNA分子 导入宿主细胞系统中扩增 目标基因表达，生成新产物，出现新形状 6.2 基因工程大肠杆菌的构建技术 6.2.1 构建流程 6.2.2 目标基因的克隆 6.2.3 表达载体构建 6.2.4 工程菌构建 6.2.1 工程菌构建流程 6.2.2 目标基因的克隆策略 目标基因：编码蛋白质或多肽的DNA序列 正确克隆的重要性： 只要有一个碱基发生（错义、无义、移码）突变，就导致编码氨基酸的变化，影响产物蛋白质的功能和生物学活性。 只要一个碱基发生同义突变，就可能导致生产过程和效率变化。 基因克隆方法的选择 PCR技术 PCR（Polymerase chain reaction，聚合酶链式反应）：由DNA聚合酶催化下，对特定DNA序列进行的复制反应。 本质：生物体的DNA复制原理在体外合成基因。 发明者：Mullis，生物技术革命性象征，1993年获得诺贝尔化学奖。 在引物指导下，以DNA为模板，由DNA聚合酶催化的扩增特定DNA序列聚合延伸形成互补序列的反