非小细胞肺癌脾虚痰湿证与肺郁痰瘀证差异的客观化研究-中西医结合临床专业论文.docxVIP

广州中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名』趣Et期：淞年箩月渗日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权广州中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)一糙熙一燧黟目期：洲5年5月为日＼。摘要目的：l临床研究探讨非小细胞肺癌脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证两个证型在免疫指标(T淋巴细胞、NK细胞和B淋巴细胞)和肿瘤标志物(CEA、CAl25、CAl5—3和CAl99)水平的差异，为中医的辨证分型和临床诊疗提供依据。2实验研究利用蛋白质组学的技术方法，对非小细胞肺癌脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证两个证型的血清蛋白质进行分析研究，筛选出两个证型之间的差异表达蛋白质，从分子生物学的角度揭示中医证型形成有关的物质基础，探讨血清蛋白质表达与疾病的中医分型之问的关系，为非小细胞肺癌的中医辨证分型提供客观化的依据。方法：l临床研究选择非小细胞肺癌脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证患者各30例，收集其一般资料、理化指标、免疫指标和肿瘤标志物的结果，利用Statal1．0统计软件进行统计分析，分析两证型在免疫指标和肿瘤标志物表达方面的差异。2实验研究对非小细胞肺癌脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证各3例患者的血清利用双向荧光差异凝胶电泳技术分离蛋白质，扫描获取凝胶图像，并用DeCyder软件对其进行分析，找出差异蛋白质点，运用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI—TOF—MS)对差异蛋白点进行胶内质谱分析，获取肽指纹图谱，以MASCOT为引擎在蛋白质数据库中进行检索，以鉴定蛋白质的成分，并在PANTHER网站搜索其分子功能、所参与的生物学过程及所属蛋白质分类等信息。结果：l临床研究本研究共选取2013年1月至201 5年2月在我院肿瘤科住院的确诊为非小细胞肺癌的患者60例为研究对象，其中辨证为脾虚痰湿证者和肺郁痰瘀证者各30例。脾虚痰湿证组中包括男性患者16例，女性患者14例，年龄34岁一73岁，腺癌26例，鳞状细胞癌4例；肺郁痰瘀证组包括男性患者17例，女性患者13例，年龄43岁一79岁，腺癌20例，鳞状细胞癌9例，腺鳞癌1例。(1)非小细胞肺癌脾虚痰湿证组与肺郁痰瘀证组之间NK细胞(CD3／16+56)水平相比，肺郁痰瘀证组略高于前者，但结果无统计学意义(乃0．05)。(2)非小细胞肺癌脾虚痰湿证组与肺郁痰瘀证组之问B淋巴细胞水平相比，肺郁痰瘀证组略高于前者，但结果无统计学意义(乃0．05)。(3)非小细胞肺癌脾虚痰湿证组与肺郁痰瘀证组之问T淋巴细胞亚群水平相比，总T细胞(CD3+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Ts细胞(CD3+CDS+)均无明显差异。(4)非小细胞肺癌脾虚痰湿证组CEA、CAl5—3和CAl99阳性率高于肺郁痰瘀证组，但结果无统计学意义(扮0．05)；肺郁痰瘀证组CAl25阳性率高于脾虚痰湿证组，结果有统计学意义(尺0．05)。2实验研究非小细胞肺癌脾虚痰湿证组与肺郁痰瘀证组两证型之间有6个差异表达蛋白质，在非小细胞肺癌脾虚痰湿证组表达上调、在肺郁痰瘀证组下调的是C09和C04A；在脾虚痰湿证组表达下调，在肺郁痰瘀证组表达上调的是ITIH4、RI．A2、MAT和LHX5。经生物信息学检索显示，C09、C04A、ITIH4和A1AT四个蛋白质直接或问接参与补体激活、蛋白水解、催化活性的调节，在蛋白质分类中属丝氨酸蛋白酶或其抑制因子，这提示非小细胞肺癌脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证在机体的补体激活、蛋白水解、催化活性的调节等过程可能存在差异。结论：1临床研究(1)非小细胞肺癌肺郁痰瘀证组NK细胞(CD3／16+56)水平、B淋巴细胞均有高于脾虚痰湿证组的趋势，结果无统计学意义(乃0．05)。非小细胞肺癌脾虚痰湿证组与肺郁痰瘀证组之间总T细胞(CD3+)、Th细胞(CD3+CD4+)、Ts细胞(CD3+CD8+)均无明显差异。出现这种结果的原因考虑为，脾虚痰湿证和肺郁痰瘀证两个证型患者的正虚和邪实的程度分别相似，因此证型间在免疫指标方面差异不明显。(2)非小细胞肺癌脾虚痰湿证组CEA、CAl5-3和CAl99阳性率有高于肺郁痰瘀证组的趋势，肺郁痰瘀证组CAl25阳性率有高于脾虚痰湿证组的趋势，结果有统计学意义(尺0．05)。两个证型在肿瘤标志物