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分泌细胞因子的细胞 红细胞 SPA 细胞因子的抗体 补体 返回 二、细胞因子受体测定的基本原理及方法 1. 活细胞吸收试验 （定性） 2. 同位素标记细胞因子的放射受体检测 3. 抗受体McAb法 4. 重组细胞因子与受体交联分析 5. 受体cDNA分析 6. 可溶性细胞因子受体的检测 返回 返回 优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。 缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。 MTT法 [3-4,4-二甲基噻唑－2]，5－二苯基四氮唑溴盐，简称MTT； 线粒体的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物，经盐酸—异丙醇或DMSO溶解后为蓝色溶液； 比色测定间接反映活细胞数量。 刺激指数(SI)=试验孔OD570nm值/对照孔OD570nm值 CFSE：羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯 CFSE染色法 返回 BrdU掺入法 BrdU: 5-Bromo-2-deoxyUridine (5-溴脱氧尿嘧啶核苷) 51Cr释放法 杀伤率（%）= 实验孔cpm-自发释放孔cpm 最大释放孔cpm-自发释放孔cpm ×100 T细胞细胞毒试验示意图 返回 返回 乳酸脱氢酶（LDH）释放法 CTL+靶细胞 释放LDH 碘硝基氯化四氮唑（INT） 红色甲臜（farmazan） 比活性测定（OD值） 杀伤率（%）= 实验孔OD值-自发释放孔OD值 最大释放孔OD值-自发释放孔OD值 ×100 皮肤试验 （迟发型超敏反应） 返回 三、其他免疫细胞功能的检测 1. 巨噬细胞功能的检测 3. NK细胞和LAK细胞功能的检测 返回 2. 嗜中性粒细胞功能的检测 4. DC细胞功能检测 1. 巨噬细胞功能的检测 炭粒廓清试验 吞噬功能的检测 巨噬细胞表面受体的检测 炭粒廓清试验 小鼠静脉注射炭粒悬液 测定血中炭粒的浓度 血液中炭粒被廓清的速度 巨噬细胞功能的检测 吞噬率 = 吞噬指数 = 吞噬红细胞的巨噬细胞数 计数的巨噬细胞数 × 100% 吞噬红细胞的总数 计数的巨噬细胞数 × 100% 返回 巨噬细胞EA、EAC玫瑰花环形成示意图 炎症反应的过程 红、肿、热、痛 嗜中性粒细胞趋化功能检测 返回 外周血淋巴细胞在体外经过IL-2培养 后，诱导产生的一类新型杀伤细胞 杀伤肿瘤细胞不需抗原致敏 不受MHC限制性，无特异性 LAK（lymphokine activated killer cells） NK细胞和LAK细胞功能的检测 NK细胞的靶细胞：K562 LAK细胞的靶细胞：LiBr 返回 DC细胞功能检测 1.抗原摄取能力的测定 流式细胞仪检测对抗原的吞噬 (FITC-dextran) 2.协同刺激分子的检测 流式细胞术 (CD80,CD86) 3. T细胞活化增殖和细胞因子检测 细胞活化增殖试验 细胞因子检测技术 (IL-2,IFN-γ) 返回 第四节 细胞因子及其受体的检测技术 一、细胞因子测定的基本原理及方法 二、细胞因子受体测定的基本原理及方法 返回 返回 细胞因子受体 返回 一、细胞因子测定的基本原理及方法 1. 生物活性检测技术（依赖性细胞株、功能测定等） 2. 免疫学检测技术（ELISA、RIA） 3. 分子生物学技术（分子杂交技术、PCR） 4. 单个细胞产生细胞因子的测定技术（ELISPOT，反向溶血空斑试验） 返回 返回 不足：并非所有的细胞因子都能找到相应的细胞株 返回 返回 酶联免疫斑点试验 第二节 体液免疫功能的检测 一、免疫球蛋白的定量检测 二、B细胞数目及功能的检测 返回 一、免疫球蛋白的定量检测 返回 （1）单相免疫扩散试验 （2）双相免疫扩散试验 （3）火箭电泳 （4）中和反应 （5）ELISA 单相免疫扩散试验 返回 双相免疫扩散试验 双相免疫扩散试验 返回 （3）火箭电泳 返回 血清抗体 病毒 接种细胞或鸡胚 计算半数保护率（PD50） （4）中和反应 返回 返回 二、B细胞数目及功能的检测 1. 外周血B细胞数目的检测 2. 外周血B细胞功能的检测 返回 1. 外周血B细胞数目的检测 ◆ 免疫荧光技术 ◆ 花环试验 返回 荧光显微镜 返回 CD19 CD3 流式细胞仪 B细胞EA、EAC玫瑰花环形成示意图 返回 2. 外周血B细胞功能的检测 ◆ B细胞非特异性增殖 ◆ 抗体产生能力 返回 返回 B细胞+刺激物（PWM，LPS） 溶血空斑试验 酶联免疫斑点试验 返回 第三节 细胞免疫功能的检测 一、T细胞亚群和数目的检测 二、T细胞功能的检测 三、其他免疫细胞功能的检测 返回 一、T细胞亚群和数目的检测 2. 免疫荧光技术 1. 花环试验 3. 免疫酶细胞技术 返回 返回 玫瑰花环试验 正常范围:60-80% E-花环形成