放射生物学专业优秀论文 人类uhrf1基因肿瘤生物学功能的研究.docVIP

放射生物学专业优秀论文 人类UHRF1基因肿瘤生物学功能的研究 关键词：hUHRF1基因 乳癌 肿瘤生物学 放射治疗 摘要：目的：研究hUHRF1基因表达水平改变对乳癌细胞生长、增殖、侵袭、转移以及放射治疗敏感性的影响，及其生物学功能的作用机制，为研究乳癌的发生、发展和治疗提供了新的研究方向和理论基础，为将来hUHRF1基因在肿瘤临床治疗应用提供理论基础和实验依据。 方法： ①采用Western Blot法，检测多种人肿瘤细胞和正常细胞中hUHRF1的蛋白表达情况；Northern Blot法对临床乳癌组织样本和正常乳腺组织中hUHRF1的RNA表达水平进行检测； ②根据GeneBank中hUHRF1的基因序列，自行设计扩增hUHRF1基因全长cDNA的引物一对，构建hUHRF1的真核表达载体和腺病毒表达载体； ③采用阳离子脂质体Lipofactamin2000介导的方法，进行hUHRF1基因转染，在含G418的培养基中筛选阳性克隆，采用RT—PCR和Western Blot法检测阳性克隆中hUHRF1的RNA和蛋白表达水平； ④采用MTT法观察hUHRF1基因转染，对体外培养的不同p53基因表型、不同组织来源的乳癌细胞生长、增殖的影响；皮下瘤液接种法，制备乳癌动物模型，观察hUHRF1基因在体内对乳癌生长的影响； ⑤细胞接受不同剂量的X射线、UV辐照和γ