【生物】浙科版选修3讲义：第一章 基因工程 第一节 第2课时 Word版含答案.docxVIP

第2课时　获取目的基因、构建基因表达载体[学习导航]　1.概述获取目的基因的方法，特别说明PCR的原理。2.结合图1－10，说出基因表达载体的构建。[重难点击]　获取目的基因的途径及基因表达载体的构建。方式一　抑制疾病传播的转基因蚊子巴西等拉美国家深受致倦库蚊的危害。致倦库蚊可携带多种病毒和寄生虫，能够传播脑炎、丝虫等传染病，而这些传染病常年在拉美国家肆虐。为了抑制疾病的传播，巴西科学家培育出了一种转基因雄性致倦库蚊。科学家在雄性致倦库蚊体内植入一种特殊基因，当具该基因的转基因雄蚊与野生雌蚊交配时，这种基因可以进入雌蚊的基因组，并使雌蚊死亡，从而减少了该种蚊子的数量，达到抑制疾病传播的目的。怎样才能最终得到转基因雄蚊呢？让我们一起来学习基因工程的基本操作程序吧！方式二　师：出示我国有知识产权的转基因抗虫棉的培育图解：问：转基因抗虫棉的培育需要哪些步骤？学生看图并回答：首先要获得目的基因，其次将目的基因连接到Ti质粒上，然后将重组的Ti质粒导入受体细胞，最后要重建转基因植物。根据学生回答补充：还需检测抗虫基因是否已经进入棉花植株，并由此引出基因工程的四部曲。一、获取目的基因1．通过基因文库获取目的基因(1)概念先用酶切等方法将某种生物细胞的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，再将这些片段分别和载体连接起来，导入受体菌的群体并储存起来，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，这个群体称为基因文库。(2)种类2．通过PCR技术扩增目的基因(1)原理：DNA分子半保留复制。(2)基本过程①加入反应物质：在离心管中加入所需要的模板DNA、引物、4种脱氧核苷酸以及TaqDNA聚合酶。②变性：加热至94 ℃左右，使DNA中的氢键断裂，双链解开。③退火(复性)：冷却到55 ℃左右，引物与单链DNA相应互补序列结合。④延伸：加热至72 ℃左右，在TaqDNA聚合酶的作用下，沿模板延伸子链，最终合成2条DNA分子。(3)若PCR过程中，扩增循环的次数是n，则目的基因的量将被扩增2n倍。(4)PCR技术中因为需要在高温下进行，因此TaqDNA聚合酶需要有什么特性？答案　具有热稳定性。3．通过化学方法直接人工合成目的基因如果目的基因较小，脱氧核苷酸序列又已知，可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。1．从基因文库中获取目的基因(1)cDNA文库是从某种生物的某一细胞中提取出mRNA，经逆转录过程获得的基因文库，为什么该基因文库仅含有该生物的部分基因？答案　由于基因的选择性表达，某种生物的某一细胞中仅有部分基因转录出mRNA，所以由该细胞中的mRNA逆转录得到的基因文库仅含该生物的部分基因。(2)结合概念，从范围上比较基因组文库和cDNA文库(部分基因文库)之间的大小关系：基因组文库cDNA文库。(3)基因文库的组建过程所包含基因工程的步骤①目的基因的获取：将某种生物体内的DNA全部提取出来，选用适当的限制酶，将DNA切成一定范围大小的DNA片段。②重组质粒的构建：将所获得的DNA片段分别与载体连接起来。③目的基因导入受体细胞：将重组质粒导入受体菌的群体中储存。2．PCR技术与DNA复制的比较比较项目DNA复制PCR技术区别解旋方式解旋酶催化DNA在高温下变性解旋场所细胞内(主要在细胞核内)细胞外(主要在PCR扩增仪中)酶解旋酶、DNA聚合酶热稳定的DNA聚合酶温度细胞内温和条件控制温度，需在较高温度下进行结果合成DNA分子合成DNA片段或基因联系(1)模板：均需要脱氧核苷酸双链作为模板(2)原料：均为四种脱氧核苷酸(3)酶：均需DNA聚合酶(4)引物：都需要引物，使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的合成归纳总结　两种人工合成目的基因的方法比较(1)逆转录法主要用于相对分子质量较大而又不知其序列的基因，它是以目的基因的mRNA为模板，借助逆转录酶合成碱基互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA。其过程如下图：(2)化学合成法即依照某一蛋白质的氨基酸序列，通过密码子推算出其基因序列，然后直接合成目的基因。其过程如下图：由于真核细胞的基因含有不表达的DNA片段，不能直接用于基因的扩增和表达，因此，在获取真核细胞中的目的基因时，一般是用人工合成目的基因的方法。1．为从根本上解决水稻中的高植酸问题，可将植酸酶基因导入水稻，培育低植酸转基因水稻品种。下图是获取植酸酶基因的流程。据图回答下列问题：(1)B过程需要的酶是____________。(2)图中基因组文库________(填“小于”“大于”或“等于”)cDNA文库。(3)目的基因Ⅰ和Ⅱ除可从构建的文库中分离外，还可以分别利用图中________和________为模板直接进行PCR扩增，该过程中所用酶的显著特点是____________。答案　(1)逆转录酶　(2)大于　(3)DNA