内分泌与代谢病学专业优秀论文 急性血清淀粉样蛋白a对3t3-l1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及其机制研究.doc

内分泌与代谢病学专业优秀论文 急性血清淀粉样蛋白A对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及其机制研究 关键词：2型糖尿病 血清淀粉样蛋白A 脂肪细胞 胰岛素抵抗 炎症因子 Rh-SAA JNK 发病机制 摘要：炎症因子SAA是否通过激活胰岛素作用靶细胞的JNK活性而介导IR的呢？目前国内外均未见此方面的报道，我们将对此进行初步探讨。 本课题以3T3-L1前脂肪细胞为研究载体，胰岛素抵抗为研究的切入点，探索脂肪源性炎症因子SAA与胰岛素抵抗的关系及SAA介导胰岛素抵抗的可能机制。以期为胰岛素抵抗和2型糖尿病的防治提供更多的理论支持。具体研究内容分为三章。 第一章:急性血清淀粉样蛋白A在3T3-L1脂肪细胞的表达和胰岛素抵抗的关系研究 [目的]: 通过观察A-SAA在胰岛素敏感脂肪细胞和胰岛素抵抗脂肪细胞的表达，探讨A-SAA与胰岛素抵抗的关系。 [方法]: 1.3T3-L1前脂肪细胞加入诱导分化剂8～10天后，90%以上呈脂肪细胞表型，可用于实验。 2.建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型：将成熟的脂肪细胞分别暴露于三种不同浓度的TNF-α（1μg/L、10μg/L、20μg/L）、三种不同浓度的地塞米松（10nmol/L、100nmol/L、1000nmol/L）中培养48小时，建立抵抗程度不同的细胞胰岛素抵抗模型。在Washout试验中，20μg/LTNF-α和1000nmol/L地塞米松分别加入脂肪细胞中培养48小时后，移出含TNF-α和地塞米松的培养液，换入普通培养液，继续培养12小时后行葡萄糖转运试验。 3.采用3H-2-脱氧葡萄糖（3H-2-DG）摄入法检测脂肪细胞对葡萄糖的转运率。其中，基础状态下葡萄糖摄取（基础率）是指无胰岛素时细胞对3H-2-DG的摄取率。胰岛素刺激率是指胰岛素刺激后细胞对3H-2-DG的摄取率。将对照组胰岛素刺激率设为100%，所有值以该值为标准进行计算，以各组3H-2-DG摄入减少量来反映胰岛素的抵抗程度。 4.采用RT-PCR法检测SAA3mRNA的表达，ELISA法检测培养细胞上清液A-SAA蛋白含量。 5.统计学处理：实验数据均采用各组的均值±标准差（x±s）表示，采用SPSS13.0统计软件包行单因素方差分析（One-Way ANOVA），进一步多重比较采用LSD法。检验标准为α＝0.05。 [结果]: 1.脂肪细胞形态变化3T3-L1前脂肪细胞呈典型的梭形，胞浆中无脂滴，形态与成纤维细胞相似。诱导分化第8～10天，90%以上的细胞表现为细胞浆丰富，含有大量的脂滴，部分细胞可见脂滴分布于核周围，形成“戒环样”结构，为典型的成熟脂肪细胞形态，油红0染色后脂滴着红色。 2.TNF-α对细胞葡萄糖摄取的影响与对照组比，5μg/L、10μg/L和20μg/LTNF-α作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了25%（Pamp;lt;0.01）、43%（Pamp;lt;0.01）、58%（Pamp;lt;0.01）；进一步多重比较显示，10μg/L TNF-α组与5μg/L TNF-α组（Pamp;lt;0.01）、20μg/L TNF-α组与5μg/L TNF-α组（Pamp;lt;0.01）、20μg/L TNF-α组与10μg/L TNF-α组（Pamp;lt;0.01）的葡萄糖摄取均有显著性差异。 3.地塞米松对细胞葡萄糖摄取的影响与对照组比，10nmol/L、100nmol/L和1000nmol/L地塞米松作用各组分别使葡萄糖摄取率减少了15%（Pamp;lt;0.05）、40%（Pamp;lt;0.01）、55%（Pamp;lt;0.01）；进一步多重比较显示，100nmol/L地米组与10nmol/L地米组（Pamp;lt;0.01），1000nmol/L地米组与10nmol/L地米组（Pamp;lt;0.01），1000nmol/L地米组与100nmol/L地米组（Pamp;lt;0.01）的葡萄糖摄取均有显著性差异。 [结论]: 1.地塞米松和TNF-α均能在体外成功的建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型。且在一定时间内，地塞米松和TNF-α均以剂量依赖方式影响脂肪细胞的胰岛素抵抗程度。 2.胰岛素敏感的3T3-LI脂肪细胞SAA3mRNA和A-SAA蛋白只有少量表达，胰岛素抵抗的3T3-LI脂肪细胞的SAA3 mRNA和A-SAA蛋白表达量显著增加，其表达量随着细胞胰岛素抵抗程度的增加而增加。提示A-SAA与胰岛素抵抗有密切的关系，可能是反应胰岛素抵抗的一个生物学指标。 第二章:重组人血清淀粉样蛋白A对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响 [目的]: 通过检测不同浓度和不同时间点重组人血清淀粉样蛋白A（Rh-SAA）干