内分泌与代谢病学专业优秀论文 葡萄糖浓度波动诱导ins-1细胞氧化应激及凋亡的损伤机制的初探.doc

内分泌与代谢病学专业优秀论文 葡萄糖浓度波动诱导INS-1细胞氧化应激及凋亡的损伤机制的初探 关键词：糖尿病 胰岛β细胞 波动葡萄糖 氧化应激 细胞凋亡 INS-1细胞 抗凋亡蛋白 摘要：为探讨葡萄糖浓度波动对胰岛β细胞的毒性效应可能性的机制，本研究采用大鼠胰岛细胞瘤系INS-1细胞，将其孵育在波动性高糖环境中72h，随即观察细胞中抗氧化酶和氧化标志物水平的改变以及凋亡相关蛋白的表达。 本研究包括以下两部分： 第一章、葡萄糖浓度波动对INS-1细胞磷酸戊糖途径的影响。 目的：观察葡萄糖浓度波动对体外培养的INS-1细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活性、NADPH含量以及氧化应激的改变，初步探讨葡萄糖浓度波动对胰岛β细胞磷酸戊糖途径的影响。 对象和方法： 1、以大鼠胰岛细胞瘤株INS-1细胞为实验对象，共干预72小时； 2、实验共分为六个组： A组：正常对照组（NC组：葡萄糖浓度为5．5mM的RPMI1640完全培养基）； B组：持续性高浓度葡萄糖组（HG组：葡萄糖浓度为16．7mM的RPMI1640完全培养基）； C组：葡萄糖浓度波动组（FHG组：葡萄糖浓度为16．7mM的RPMI1640完全培养基培养2小时后更换为葡萄糖浓度为5．5mM的RPMI1640完全培养基培养3小时，每日重复3次，夜间9小时维持在葡萄糖浓度为5．5mM的RPMI1640完全培养基培养）； D组：N-乙酰半胱氨酸抗氧化剂（NAC 1．0mM）+NC组； E组：NAC+HG组；F组：NAC+FHG组。 3、利用荧光探针2，7-二氯氢化荧光素（2amp;#39;，7amp;#39;-dichlorodihydro fluorescein，DCFH），在488nm激发波长，525nm发射波长条件下，流式细胞仪检测各组细胞的平均荧光强度，比较各组细胞内ROS的产量。四氮唑蓝定量检测细胞内G6PD的活性；分光光度计法测定NADPH含量。 4、实验数据采用平均数±标准差（x±s）表示，数据采用析因方差分析；各组内均数比较采用单向方差分析（One-way ANOVA）；多重比较采用LSD法，两独立样本比较采用t检验。Pamp;lt;0．05被认为差异具有统计学意义。 结果： 1、ROS产量比较培养72小时后，NC组、HG组、FHG组、NAC+NC组、NAC+HG组、NAC+FHG组的ROS产量分别为（37．767±2．312，86．967±7．968，124．267±10．036，36．697±6．093，60．917±2．612，51．473±3．361），其中HG组和FHG组的ROS产量较NC组均明显升高，差异均有统计学意义（Pamp;lt;0．01，Pamp;lt;0．01），且FHG组比HG组升高的更为显著，差异有统计学意义（P=0．001）；经抗氧化剂NAC处理之后，NAC+FHG组的ROS产量有所下降，与FHG组相比，差异有统计学意义（t=11．913，Pamp;lt;0．01）； NAC+HG组的ROS产量下降，与HG相比有明显的改善（t=5． 381，P=0．006）。 2、各组间G6PD活性比较培养72小时后，NC组、HG组、FHG组、NAC+NC组、NAC+HG组、NAC+FHG组的G6PD活性分别为（1．249±0．030，1．091±0．018，1．033±0．013，1．215±0．099，1．119±0．021，1．213±0．012）。统计分析显示：与正常对照组相比，HG和FHG组G6PD活性均明显降低、差异有统计学意义（Pamp;lt;0．01，Pamp;lt;0．01），且FHG组较HG降低的更为显著，差异有统计学意义（P=0．005）；经抗氧化剂NAC处理之后，波动高糖组的G6PD活性明显增高，与FHG组相比有统计学意义（t=-18．114，Pamp;lt;0．01）；而持续高糖组经NAC处理后，G6PD活性得到部分改善，但差异无统计学意义（t=-1．714，Pamp;gt;0．05）。 3、NADPH含量比较NC组、HG组、FHG组、NAC+NC组、NAC+HG组、NAC+FHG组的NADPH含量分别为（0．095±0．05，0．077±0．011，0．059±0．004，0．097±0．005，0．087±0．009，0．093±0．004）。统计分析显示：与正常对照组相比，HG和FHG组NADPH含量均明显降低、差异有统计学意义（Pamp;lt;0．05，Pamp;lt;0．01），且FHG组较HG降低的更为显著，差异有统计学意义（Pamp;lt;0．05）：经抗氧化剂NAC处理之后，NAC+FHG组的NADPH含量增加，与FHG组相比有统计学意义（t=-10．