久效磷农药对雄性金鱼(carassius auratus)性激素合成与转化的影响机制研究-study on the influence mechanism of monocrotophos pesticide on sex hormone synthesis and transformation of male goldfish ( carassius auratus ).docxVIP

久效磷农药对雄性金鱼(Carassius auratus)性激素合成与转化的影响机制研究 摘要久效磷农药已被证实具有潜在的环境雌激素活性，可导致雄性金鱼、孔雀鱼 体内雄激素睾酮(testosterone, T)水平降低、雌激素 17β-雌二醇(17β-estradiol, E2) 水平升高。鱼类性激素的合成涉及一系列的酶促反应，久效磷农药对性激素合成 途径中间环节的 干扰可能是 导致鱼类 雄 雌 激素比例失衡的 原 因。本文 采用 0.01mg/L、0.10mg/L 和 1.00mg/L 久效磷农药暴露雄性金鱼 21 天，首先检测性激 素合成底物胆固醇含量变化情况，其次在克隆金鱼多种类固醇生成酶 cDNA 片 段的基础上检测久效磷暴露对其 mRNA 表达水平的影响，最后检测久效磷暴露 条件下性激素合成途径中间产物和效应激素的含量，并分析类固醇生成酶基因表 达变化与性激素含量异常的相关关系，以期从性激素合成与转化的角度阐明久效 磷农药导致雄性鱼类雄雌激素比例失衡的机制。本文研究结果表明：(1) 0.01mg/L、0.10mg/L 和 1.00mg/L 久效磷农药暴露雄性金鱼 21 天，采用 全自动生化分析仪测定雄性金鱼血浆中总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度 脂蛋白胆固醇、甘油三酯的含量。结果表明：0.10mg/L 久效磷农药可使雄鱼血/view/213032.htm 浆中高密度脂蛋白胆固醇含量显著降低，可能会导致运输到精巢组织的性激素合 成底物含量降低，从而导致 T 合成受到抑制。(2) 0.01mg/L、0.10mg/L 和 1.00mg/L 久效磷农药暴露雄性金鱼 21 天，采用 实时定量 PCR(real-time PCR) 检测精巢中 类 固 醇 激 素 合 成 急 性 调 节 蛋 白 (steroidogenic acute regulatory protein, StAR)及胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side chain cleavage enzyme, P450scc) 、 3β- 羟类固醇脱氢酶 (3β-hydroxysteroid dehydrogenase, 3β-HSD)、17α 羟化酶(cytochrome P450 17 alpha-hydroxylase, 17, 20-lyase, P450c17)等类固醇生成酶 mRNA 的表达水平，采用酶联免疫分析方法 (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)测定血浆中孕烯醇酮、孕酮、17α-羟基孕 烯醇酮、17α-羟基孕酮、脱氢表雄酮、雄烯二酮、雌酮、11β-羟基睾酮等性激素 合成中间产物的含量。结果表明：久效磷农药抑制雄性金鱼精巢中 StAR mRNA 的表达水平，可能会导致转运到线粒体内膜的胆固醇含量减少；久效磷农药抑制 P450scc 的表达，从而降低血浆中孕烯醇酮的含量；久效磷农药降低 3β-HSD、P450c17 mRNA 的表达水平，导致雄烯二酮含量减少；由此推测久效磷农药对上述类固醇生成途径的抑制作用，是造成雄性鱼类体内雄激素 T 含量降低的另一 机制。(3) 0.01mg/L、0.10mg/L 和 1.00mg/L 久效磷农药暴露雄性金鱼 21 天，采用 real-time PCR 检测精巢中 20β-羟类固醇脱氢酶(20β-hydroxysteroid dehydrogenase, 20β-HSD)、芳香化酶(cytochrome P450 aromatase, P450arom)、17β-羟类固醇脱氢 酶I(17β-hydroxysteroiddehydrogenasetypeI,17β-HSD1) 、 11β- 羟化酶 (11β-hydroxylase,P45011β) 、 11β- 羟 类 固 醇 脱 氢 酶II(11β-hydroxysteroid dehydrogenase type II, 11β-HSD2) mRNA 表达水平，采用 ELISA 法检测血浆中 17α,20β-双羟孕酮、11-酮基睾酮(11-ketotestosterone, 11-KT)等效应激素的含量。 结果表明：久效磷农药提高 P450arom、17β-HSD1 mRNA 表达水平，推测久效磷 农药对这两种类固醇生成酶基因表达的促进作用，是造成雄性鱼类体内雌激素 E2 含量升高的机制，且 P450arom 表达的升高可能进一步造成 T 含量的降低；久 效磷农药促进 20β-HSD mRNA 表达，导致 17α,20β-双羟孕酮含量升高；久效磷 农药虽然引起 P45011β、11β-HSD2 mRNA 表达水平的降低，但是本文结果表明其 对 11-KT 含量无显著影响。综上所述，本文从胆固醇含量