高效液相色谱法及其在中药分析中应用.ppt

高效液相色谱法及其在中药分析中的应用 高效液相色谱——固定相 化学键合相硅胶 octadecyl Si-[CH2]17-CH3 C18 octyl Si-[CH2]7-CH3 C8 cyanopropyl Si-[CH2]3-CN CN aminopropyl Si-[CH2]3-NH2 NH2 固定相的其他性能 载体的形状 球形 无定形 粒径 3~10μm, 1.7~2.5μm 孔径 150? 分析分子量2000的化合物;300? 分析分子量2000的化合物 表面积 键合基团的表面覆盖度 含碳量 流动相的混合输入和洗脱方式 离线混合 配制 滤过 脱气 在线混合 低压在线混合 高压在线混合 洗脱 等度洗脱 梯度洗脱 高效液相色谱仪器——泵系统 高效液相色谱仪器——进样器 高效液相色谱仪器——检测器 DAD检测器3D图 超高效液相色谱仪（ UPLC） 高效液相色谱法在药典中的应用 HPLC与TLC比较(2005版) HPLC在中药质量分析和检测中的应用 有效成分、指标成分的检测； 杂质或有关物质检查； 添加物或有害残留物质的检测； 中药指纹谱分析 杂质或有关物质检查 添加物或有害残留物质的检测 添加物或有害残留物质的检测 中药指纹谱分析 2005版HPLC方法应用 有效成分\特征成分含量测定 多成分指标含量测定 多种检测器应用 有效成分\特征成分含量测定 有效成分\特征成分含量测定 多成分指标含量测定 ELSD检测方法应用 银杏叶提取物中银杏酸的限量检查 高效液相色谱法附录修订内容(2005版) 修订内容和特点： 明确了HPLC方法的几种分离机制，为分类应用提供了基础； 明确了数据处理系统（色谱工作站）作为色谱信号记录; 以较大篇幅增加了色谱柱、检测器、流动相的内容，适应快速发展的、日趋成熟的HPLC技术的要求。 对仪器的一般要求(2000版) 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。离子交换填充剂，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂，用于分子排阻色谱等。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。 在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法(附录Ⅴ A)项下对溶剂的要求。 对仪器的一般要求(2005版) 1 所用的仪器为高效液相色谱仪。仪器应定期检定并符合有关规定。 （1）色谱柱 最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基硅烷键合相和氨基硅烷键合相等）也有使用。正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。离子交换填充剂用于离子交换色谱；凝胶或高分子多孔微球等填充剂用于分子排阻色谱等；手性键合填充剂用于对映异构体的拆分分析。 对仪器的一般要求(2005版) 2 填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响待测物的保留行为和分离效果。孔径在150?以下的填料适合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在300?以上的填料。 对仪器的一般要求(2005版) 3 以硅胶为载体的一般键合固定相填充剂适用pH2～8的流动相。当pH大于8时，可使载体硅胶溶解；当pH小于2时，与硅胶相连的化学键合相易水解脱落。当色谱系统中需使用pH大于8的流动相时，应选用耐碱的填充剂，如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等；当需使用pH小于2的流动相时，应选用耐酸的填充剂，如具有大体积侧链能产生空间位阻保护作用的二异丙基或二异丁基取代十八烷基硅烷键合硅胶、有机-无机杂化填充剂等。 对仪器的一般要求(2005版) 4 (2)检测器 最常用的检测器为紫外吸收检测器，其他常见的检测器有二极管阵列检测器（DAD）、荧光检测器、示差折光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器和质谱检测器等。 紫外、二极管阵列、荧光、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与待测物的质量有关，还与化合物的结构有关；示差折光检测器和蒸发光散射检测器为通用型检测器，对所有的化合物均有响应；蒸发光散射检测器属质量型检测器，对结构类似的化合物，其响应值几乎仅