口腔黏膜重建尿道的初步实验研究.pdfVIP

1242 Chinese Journal of Reparative and Reconstructive October, August 2008, Vol. 22, No.10 · · 应用组织工程口腔黏膜重建尿道的初步实验研究 李超 徐月敏 宋鲁杰 崔磊 尹烁1 1 1 2 2 【摘  要】    目的 探讨兔口腔黏膜细胞的体外培养方法，并以其为种子细胞与异体膀胱黏膜下脱细胞基质 （bladder acellular matrix graft ，BAMG ）复合，构建组织工程尿道。  方法 18 只 10 周龄雄性新西兰大耳白兔，体重 0.3 ～0.5 kg 。取其中12 只兔口腔黏膜组织，分离获得口腔黏膜细胞。将口腔黏膜细胞分别接种于有3T3 细胞及无3T3 细胞的培养皿进行培养，接种后第2 天于倒置相差显微镜下观察细胞形态变化，绘制细胞生长曲线，观察生长增殖情况， 并行免疫荧光组织化学染色鉴定。取余6 只兔膀胱，经脱细胞处理制备BAMG ，随机取1 cm × 1 cm 组织行HE 染色，观 察脱细胞效果。将接种于有3T3 细胞培养皿培养获得的第2 代口腔黏膜细胞种植于BAMG 上，培养1 周后，行HE 染色 及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG 的复合状况。 结果 倒置相差显微镜下观察，接种于有3T3 细胞培养皿的口 腔黏膜细胞可传至7 ～8 代，其细胞形态均一，功能良好；无3T3 细胞培养皿的口腔黏膜细胞形态多样，传至第2 代时，即 开始出现老化。细胞生长曲线显示，两种方法培养的口腔黏膜细胞均于第8 天开始呈对数增长，第14 天达峰值。接种于 有3T3 细胞培养皿的口腔黏膜细胞，培养至融合时所获得细胞数量明显多于接种于无3T3 细胞培养皿的口腔黏膜细胞。 两种方法培养的口腔黏膜细胞行免疫荧光染色，均呈绿色荧光。HE 染色观察，BAMG 经脱细胞处理后未见细胞，脱细胞 效果良好。复合培养1 周后，HE 染色及扫描电镜观察口腔黏膜细胞与BAMG 复合良好。 结论 兔口腔黏膜细胞可在 体外成功培养、扩增，与同种异体BAMG 复合后生长良好，为构建组织工程尿道提供了一种新的选择。 【关键词】 组织工程尿道 口腔黏膜细胞 膀胱黏膜下脱细胞基质 体外复合 兔 中图分类号： R318 R69 文献标志码：A A PRELIMINARY EXPERIMENTAL STUDY ON URETHRAL RECONSTRUCTION USING TISSUE ENGINEERED 1 1 1 2 2 1 /LI Chao , XU Yuemin , SONG Lujie , CUI Lei , YIN Shuo . Department of Urology, the Sixth People s Hospital, ORAL MUCOSA ’ Jiaotong University of Shanghai, Shanghai, 200233, P.R.China; 2 Shanghai Tissue Engineering Research and Development Center. Corresponding author: XU Yuemin, E-mail: xuyuemin@263.net 【Abstract 】    Objective To investigate the feasibil ity of replacing urinary epithel ial cells with oral mucosa cell to reconstruct tissu