多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性及血清活性分析.docVIP

多囊卵巢综合征患者血管紧张素转换酶基因多态性及血清活性分析 作者：李清友,刘鹏,徐闽,金伟新 单位：066000 河北省秦皇岛市海港医院检验科(李清友、徐闽)，妇产科(金伟新)；河北省秦皇岛市第三医院检验科(刘鹏) 【关键词】 多囊卵巢综合征 多囊卵巢综合征(PCOS)主要表现为卵子的成熟和排卵障碍。近年来发现PCOS患者有在肾素血管紧张素系统(RAS)功能亢进现象。本文通过测定PCOS患者血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性及血清ACE水平，以进一步探讨ACE基因多态性与RAS的关系。 1 资料与方法 1.1 一般资料 自2002年2月至2007年5月收集在我院产科就诊的PCOS患者102例，年龄17～36岁，平均年龄27.9岁；其中未婚16例，已婚86例，不孕年限2～8年。同时选择月经周期正常的我院健康体检者101例作为对照组，年龄20～36岁，平均年龄28.1岁；其中未婚20例，已婚并生育40例，2组年龄差异无统计学意义(P＞0.05)，既往均无糖尿病、高血压、心脏病及肝肾疾患，无输血、免疫治疗史。 1.2 方法 1.2.1 ACE引物及PCR扩增：PCR引物由Sangon公司合成。引物1：5rsquo;CrGCAGACCACTCCCATCCITTcr3rsquo;；引物2：5rsquo;GATGTGCCCATCACATICGTCAGAA3rsquo; 。PCR反应体系2.5 mu;l，DNA2OO ng，Taq酶为Sangon公司生产。PTC100型扩增仪，PCR程序：94℃ 5 min预变性，94℃ 1 min、55℃ 1 min、72℃ 2 min，共30个循环；PCR产物行2％Agrose，溴化乙锭染色，紫外灯下判断结果。 1.2.2 血清ACE水平测定：在OLYMPUS AU400全自动生化分析仪上用宁波美康生物科技有限公司生产的ACE试剂采用速率法检测。 1.3 统计学分析 应用基因计数法计算基因频率，等位基因频率的比较采用chi;2检验，组间均数比较用t检验，ACE采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 基因型分布 位于ACE基因的第16内含子一般长度为287 bp，插入/缺失(I/D)使ACE基因有3种基因型：II，ID和DD型，它的插入片段相当于一个Alu重复顺序，约287bp。若只扩增出90bp的片段为DD型，只扩增出490bp的片段为II型，若同时扩增出490bp和190bp二个片段则为ID型。 2组ACE基因缺失多态性检测结果及等位基因出现频率2组比较，PCOS组DD型频率显著高于对照组，差异有统计学意义(Plt;0.05),PCOS组Ⅱ型频率显著低于对照组，差异有统计学意义(Plt;0.05)，ID型频率2组比较无统计学意义(Pgt;0.05)。PCOS组Ⅰ型等位基因频率为0.39，D型等位基因频率为0.61，对照组分别为0.70、0.30，2组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)，见表1。 2.2 血清ACE水平 PCOS患者血清ACE活性平均值与对照组比较差异有统计学意义(Plt;0.01)，见表1。表1 2组ACE基因型及基因频率比较例(略)注：与对照组比较，P＜0.05，＃P＜0.01 3 讨论 Rigat等［1］首先观察到ACE基因多态性与血清血管紧张素转换酶之间的关系。RAS是全身心血管活动的一种重要体液调节系统，人卵巢组织内也含有RAS，ACE是这一系统的关键酶，它使血管紧张素I(AngI)转换为AngⅡ，AngⅡ可能通过调节卵泡雌激素的浓度而参与卵巢功能的调节［2］，ACE受控于ACE基因，ACE基因位于人染色体17q23，其第16内含子中存在一段长度为287bp的插入片段，由于此片段的插入和缺失。产生Ⅱ(插入型)、DD(缺失型)及DI(杂合子)三种基因型。 结果表明，D等位基因频率PCOS组显著高于对照组，与国内报道一致［3］；血清ACE水平明显高于对照组。由于D等位基因的存在与RAS功能亢进有关, 而RAS功能亢进，使血清血管紧张素转换酶水平增高,促进血管紧张素Ⅰ转化为AngⅡ,较高的Ang Ⅱ水平诱导卵泡过早成熟、增殖，形成过多的雄烯二酮，表现为睾酮增加，雌二醇下降，即促进高雄激素血症形成，引起卵泡发育障碍,从而导致卵泡在各阶段闭锁，成为多囊卵巢，因此患者RAS功能亢进参与多囊卵巢的病理形成过程。 因此肾素血管紧张素系统中各指标的测定有望作为诊断的新依据，通过对ACE基因的检测，了解PCOS患者是否存在RAS功能亢进，可为临床选择ACE抑制剂进行治疗提供理论依据。该系统可能通过升高游 【参考文献】 　1 Rigat B，Hubert C，AlhensGelas F,et al．An irmertion/deletionpolymo