大观霉素产生菌色素变异株63-2号的选育及特性考察.docVIP

大观霉素产生菌色素变异株63-2号的选育及特性考察 中国抗生素杂志 2000年第4期第25卷 研究简报 作者：于广成　彭桂贤　萨仁　方淑环　付桂杰 单位：赤峰制药厂，赤峰　024001 关键词：大观霉素；色素变异株；菌种选育；特性考察 　　摘要：大观霉素产生菌47-4号菌株经自身耐药诱变育种后，其后代又经两次自然分离得到一株发生色素突变的菌种63-2号。该菌株在培养和发酵过程中的色素产生明显减少，发酵效价提高，传代稳定，其它培养及发酵特性均接近或优于其出发菌株。 　　中图分类号：Q933　　　文献标识码：A 　　文章编号：1001-8689(2000)04-0307-02 Selection of the color mutant 63-2 of spectinomycin producing strain and investigation on its characteristics Yu Guang-cheng，　Peng Gui-xian，　Sa Ren，　Fang Shu-huan　and　Fu Gui-jie 　　(Chifeng Pharmaceutical Factory，　Chifeng 024001) 　　大观霉素(壮观霉素，spectinomycin，SPCM)又名抗生素M-141，奇放线菌素(actinospectacin)，属氨基糖苷类抗生素，对革兰氏阳性菌和阴性菌均有抗菌作用，临床上主要用于治疗由淋病球菌引起的感染。 　　大观霉素产生菌在其斜面孢子培养基和发酵培养基内均产生桔黄色水溶性色素。在菌种的选育过程中，我们获得了一株发生色素突变的菌种63-2号。现报告如下。 　　1　材料与方法 　　1.1　大观霉素菌的培养及发酵方法 　　大观霉素产生菌：壮观链霉菌1043(Streptomyces spectabilis 1043)，经本实验室选育的47-4号菌株。 　　培养基主要成分：(1)斜面孢子培养基：高氏一号琼脂培养基；(2)摇瓶种子培养基：葡萄糖、黄豆饼粉、玉米浆、鱼粉；(3)摇瓶发酵培养基：淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、蛋白胨、KCl、K2HPO4。 　　将斜面孢子(在高氏1号琼脂培养基上经32℃培养7d)挖取1cm2小块接入种子摇瓶(含30ml种子培养基/250ml三角瓶)，32℃恒温振荡培养24～26h后，吸取种子液3ml接入发酵摇瓶(含30ml发酵培养基/250ml三角瓶)，于32℃摇床振荡发酵72～96h后测定发酵液效价。 　　1.2　菌种诱变处理及选育方法 　　采用紫外线和氯化锂联合诱变处理，选育出自身耐药菌株［1］，然后用自然分离方法筛选变异株。 　　1.3　发酵液效价测定方法 　　用管碟法测定大观霉素生物效价，指示菌采用肺炎克雷伯氏菌［K.pneumoniae(Schroeter) Trevisen］。 　　2　结果与讨论 　　2.1　63-2号色素变异菌株的获得 　　UV+LiCl+SPCM：紫外线和氯化锂联合诱变处理后在含大观霉素平板上分离；N：自然分离。 　　经过以上的选育工作所得到的63-2号菌株，不但产生色素突变而且其生产能力也在选育过程中不断提高。 　　2.2　63-2菌株的特性考察结果 　　将63-2号菌株与其未发生色素变异的出发菌株63号做对照实验，从以下六个方面进行摇瓶考察，以比较菌种特性的变化情况。 　　(1)斜面孢子培养时间对摇瓶效价的影响　斜面孢子培养5～9d，63-2菌株的斜面孢子培养时间与摇瓶效价的关系与出发菌株63相比无明显差异； 　　(2)斜面孢子贮存时间对摇瓶效价的影响　4℃冰箱贮存0～90d，63-2菌株斜面孢子的贮藏特性与出发菌株63相近； 　　(3)菌种传代稳定性　菌株63-2斜面连续传三代，相对效价由100到F1 88.3，F2 72.6，F3 57.2；菌株63斜面连续传三代，相对效价由100至F1 83.9，F2 54.1，F3 44.4，表明菌株63-2传代稳定性较菌株63稳定。 　　(4)发酵时间与效价关系(表1) 表1　发酵时间与效价的关系 发酵时间(h)727884909610210811463号菌株摇瓶 　　相对效价(%)100　99.9114.6112.5115.1109.6107.9108.463-2号菌株摇瓶 　　相对效价(%)100102.7100.9132.1116.4114.7116.9116.4　　表1结果表明，63-2号色素变异菌株的发酵效价在90h时出现峰值，增长幅度明显大于出发菌63号； 　　(5)发酵接种量试验　以2.5%、5%、7.5%、10%、15%种子培养液接种发酵摇瓶，可见菌株63-2接种量对发酵效价影响大于菌株63； 　　(6)发酵摇瓶装量试验　250ml三角瓶分装20、30、40和50ml发酵培养