肾素检测的最新发展情况讲解课件.ppt

肾素检测的最新发展情况 PRA带给临床最大的困扰 重复性差 周期长 依赖外送 美国Quest实验室集团 肾素浓度检测（Renin, Direct），使用化学发光法检测浓度，当天反馈结果，85%。 肾素活性检测放弃了RIA法，改用LC-MS法，一周后出结果，15%。 已开展PRC的医院 北大人民 北京阜外 北京同仁 上海中山 上海华山 上海曙光 中山一、二、三附院 广医三附院 山东省立 中南湘雅 四川省医 郑大一附院 武汉同济 * 几个问题 为什么传统上肾素检测活性？ 为什么现在肾素要变为测浓度？ 肾素前体由406个氨基酸组成，其中包含两个前片段，分别为20和46个氨基酸。成熟的肾素包含340个氨基酸，分子量为37KD。 肾素 肾素原，肾素与活性肾素的异同 肾素活性与活性肾素的区别 活性肾素在体内的意义 肾素检测的几个基本概念 无活性的肾素原 有活性的肾素原 肾素 肾素原 活性肾素 传统肾素检测试剂——肾素活性检测 试剂盒组分： 抗Ang I多抗包被管 125I标记的Ang I 校准品（6个） 质控品 酶抑制剂 洗液 检测步骤 Ang I 转化 将预冷的200ul酶抑制剂加入200ul血浆样本中，混合均匀后，分为两份，分别置于冰水浴和37度中孵育1小时，孵育后将37度的样本置于冰水浴中迅速冷却备用。 放免竞争法检测Ang I 加样 孵育 检测 在多抗包被管中加入： 校准品、质控品、待测 样本各50ul。 加入125I标记的Ang I 200ul。 充分混匀 室温(18-25°C)振荡孵育2小时 将包被管用洗液洗两次后，检测。根据标准曲线计算出样本中的Ang I 浓度 结果转换 肾素检测-PRA vs PRC 肾素检测-PRA vs PRC 血管紧张素原 肾素 血管紧张素I 降解片段 血管紧张素II 血管紧张素原酶 微生物污染 血管紧张素转化酶 目前PRA检测存在的问题 各实验室之间差异较大，无法标准化 操作复杂，重复性差，结果无互通性 除此之外 无国际标准品可参照 体外的孵育条件和体内状态差异较大 加入酶抑制剂放置血管紧张素I降解 肾素检测-PRA vs PRC 如何做到活性肾素的检测？ 关键在于那一个关键的抗体。 关键抗体 一般的肾素抗体 肾素检测-PRA vs PRC 肾素检测-PRA vs PRC Perschel et al. Clin Chem. 2004 美国内分泌学会原醛症指南 该指南同时推荐了肾素活性和浓度应用于ARR实验，同时给出了基于美国人群的不同方法学ARR的cut-off值 美国目前肾素检测的应用 安图PRC和Aldosterone诊断效力研究 中山大学附属第一医院--曹教授 放免RIA 与化学发光CLIA测醛固酮浓度呈正相关（r=0.967） 放免RIA 肾素活性与化学发光CLIA肾素浓度呈正相关（r=0.905） 放免RIA法醛固酮肾素活性比值 ARR以30为切点，灵敏度为90.2% ，特异度为92.6% ； 化学发光CLIA法 醛固酮肾素浓度比值AARR以25为切点，灵敏度为95.1%，特异度为83.3%； 两种方法检测结果计算所得醛固酮/肾素比值的ROC曲线下面积分别为?0.94?和?0.92?，ROC曲线下面积比较差异无统计学意义（P=0.52）。 *