基因工程第四章 节 目的基因的克隆.pptVIP

第四章 目的基因的克隆;5 目的基因的克隆与基因文库的构建;A 鸟枪法;鸟枪法克隆目的基因的基本战略;鸟枪法克隆目的基因的基本战略;鸟枪法操作的改进;1)?电洗脱法: 利用电泳方法将凝胶中的特定核酸分子到其它介质中； 2) 滤纸法 —核酸凝胶染色 长波紫外光确定位置 在分离带前方切一口子并插入滤纸条(其背面覆盖透析袋膜) 电泳至DNA带全部进入滤纸条 洗脱DNA 纯化、沉淀 3) 透析袋法—切下含DNA带琼脂块 放入透析袋，封口 放入电泳槽 电泳2~3小时至全部DNA离开凝胶块 反向电泳1分钟 取出DNA液 纯化、沉淀 ;鸟枪法克隆目的基因的局限性;B cDNA法;cDNA法克隆目的基因的基本战略;cDNA第二链的合成 ;cDNA第二链的合成 ;cDNA第二链的合成 ;cDNA法克隆目的基因的基本战略;cDNA法分离目的基因的基本程序;cDNA法分离目的基因的基本程序;cDNA法分离目的基因的基本程序;差异分离程序 ;cDNA克隆的优越性;cDNA法克隆目的基因的局限性;C PCR法;; 由Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总