4种果蔬种子带菌种类及其抗药性.docVIP

4种果蔬种子带菌的种类及其抗药性 　　摘 要：采用离体平皿法对西瓜、黄瓜、番茄和茄子4种果蔬种子进行了带菌检测，并测定了检测到的主要真菌种类对常见杀菌剂的抗药性。结果表明，西瓜种子表面携带的优势菌群为根霉（Rhizopus spp.）和青霉（Penicillium spp.），黄瓜为青霉和曲霉 （Aspergillus spp.），番茄和茄子为毛霉（Mucor spp.）和丝核菌（Rhizoctonia spp.）；4种种子内部寄藏的真菌都主要为青霉和根霉。抗药性检测结果表明，4种果蔬种子对苯并咪唑类杀菌剂已经产生了严重的抗药性，而对福美双和咯菌腈无抗药性。 　　关键词：种子带菌；种子处理；杀菌剂；抗药性 　　 西瓜、黄瓜、番茄和茄子都是重要的蔬菜作物，近年来因病害等导致的连作障碍问题日益突出。种子处理是控制果蔬种苗病害最经济有效的途径之一，而科学的种子处理技术是建立在对种子的带菌种类、药剂敏感性及种苗期主要种传和土传病害发生情况研究的基础之上的[1，2]。目前关于番茄和茄子带菌的报道很少，大多集中于西瓜和黄瓜带菌的研究。如印度主栽西瓜品种种子带的真菌种类主要为丝核菌（Rhizoctonia spp.）和镰刀菌（Fusarium spp.）[3]，李健强等[1]报道的新疆地区西瓜种子传带的主 　　要真菌种类为青霉（Penicillium spp.）和根霉（Rhizopus spp.）。同时，国内有关种子病理学的研究主要由中国农业大学等北方机构完成[4，5]，其研究采用的品种基本为北方的主栽品种。另外，很多植物病菌已经对多菌灵、甲基硫菌灵等苯并咪唑类杀菌剂产生了抗药性[6]，而这类药剂在种子处理中也已经使用很长时间，却没有见到有关植物种子对其抗药性的研究。因此，本研究主要对我国东部西瓜、黄瓜、番茄和茄子品种种子进行带菌检测，并测定检测到的真菌对常见种子处理药剂的敏感性，以期为科学的种子处理技术提供指导。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　 供试材料为黄瓜种子中农8号、津研4号和汉玛；番茄种子合作903、浙杂809和以色列180；茄子种子杭茄3号、杭丰1号和达拉斯；西瓜种子丰乐5号、西农8号和领先168，均购自市场。 　　 供试杀菌剂为98%多菌灵（Carbendazim）、97%福美双（Thiram）和95%咯菌腈（Fludioxonil），原药均???农业部农药检定所提供。除多菌灵用0.1 mol/L HCl溶解，其余均用丙酮溶解，配制成10 mg/mL的母液备用。 　　1.2 试验方法 　　 ①种子外部带菌检测 每个品种随机选取200粒种子，放入50 mL锥形瓶中，加入20 mL无菌水充分振荡，吸取悬浮液5 mL，以4 000 r/min的转速离心20 min，弃上清液，再加入1 mL无菌水充分振荡、浮载后吸取100 μL加到直径为9 cm的马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）平板上涂匀，放入25℃培养箱中黑暗条件下培养3~7 d后观察，记录种子外部带菌种类和分离比例[4，5，7]。每个处理5次重复，相同操作条件下设无菌水为空白对照（CK）。 　　 ②种子内部带菌检测 将每个品种的黄瓜种子在5%NaClO溶液中浸泡3 min，用无菌水冲洗3遍，取100粒种子剖开种壳和种仁，于1% NaClO溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3遍。将同一品种的整粒种子、种壳和种仁分别均匀摆放在直径为9 cm的PDA平板上，每皿摆放10~20粒或10~20个组织块，在25℃培养箱中黑暗条件下培养3~7 d后, 检查记录带菌情况、不同部位的真菌种类和分离频率[4，5]，每个处理5次重复。 　　 ③种子带菌鉴定 将分离到的真菌分别进行纯化、镜检和转管保存。根据真菌培养性状和形态特征，参考工具书进行鉴定[8，9]。 　　 ④对杀菌剂的抗药性检测 随机从各品种种子分离得到的各类真菌中每类取20个左右菌株，对于检测到总菌株数少于20个的，则测定所有菌株。将各菌株先在PDA平板上培养5 d活化，然后在同一圆周上制取菌丝块（直径0.5 cm），转移到含不同浓度供试药剂的PDA平板中央，25℃培养3~ 　　5 d后观察生长情况。各平板上最终所含有机溶剂浓度均小于1.0%，以不含药剂者为对照（CK），每处理重复3次。对于多菌灵，不能在含5 mg/L多菌灵的平板上生长的为敏感菌株，能在含100 mg/L多菌灵的平板上生长的为高水平抗性菌株。对于福美双和咯菌腈，根据各处理的菌落直径（cm），取平均值计算抑制率（%），通过浓度对数值（X）和抑制率几率值（Y） 之间的线性回归关系求出毒力回归方程和EC50值。根据EC50值来确定是否已经产生抗药性[10]。 　　 抑制率（%）=[（CK菌落直径-处理菌落直径）/（CK菌落直径-0.5）]