中国ALK阳性NSCLC诊断专家共识2013年.pptVIP

* 肿瘤细胞中存在很强的颗粒状胞浆染色（任何百分比的阳性肿瘤细胞）。 * 左栏显示了抗-ALK（D5F3） 染色，右栏显示了配对的兔单克隆阴性质控Ig染色。病例1： 注意整个肿瘤中有着均一的ALK IHC表达。 Ventana提供了系统水平的质控切片配合用于VENTANA 抗-ALK（D5F3） IHC测定。 ALK IHC 检测的质控切片来源于培养的人NSCLC细胞株，这些细胞株有ALK阳性也有的是ALK阴性。这些细胞在NBF中固定，并悬浮在琼脂基质中。然后将琼脂细胞团固定于NBF中并包被于石蜡块内，然后切成约4 μm厚的切片并贴附在带阳性电荷的载玻片中。这些质控切片以10张切片为一盒的规格进行包装并单独进行销售。 * * * * * * 手动IHC判读标准：仅推荐国际上常用的标准 “采用IHC法需注意以下两点。第一，由于ALK的蛋白表达与神经外胚层的分化有关，故其可能在小细胞肺癌和正常人的脑组织中存在表达。因此，不建议在小细胞肺癌中使用ALK融合蛋白的IHC检测。第二，IHC的阳性标准判定尚未统一。国际上曾经使用的判读标准如下：IHC 3+：5%的肿瘤细胞呈现颗粒状细胞质强着色；IHC 2+：5%的肿瘤细胞呈现中度细胞质着色；IHC 1+：5%的肿瘤细胞呈现微弱或模糊的细胞质着色或≤5%的肿瘤细胞有任何程度的着色；IHC 0：肿瘤细胞无着色。” E Thunissen, et al. Virchows Arch(2012)461:245-257 日本肺癌协会ALK诊断共识 Yoshiko Murakami, et al. Frontiers in Oncology .2012;doi: 10.3389/fonc.2012.00024 欧洲11家中心病理科ALK诊断共识 Thunnissen E, et al. Virchows Arch . 2012;461:245–257 中国ALK阳性非小细胞肺癌诊断流程图 NSCLC 活检组织标本 EGFR突变检测 腺癌（粘液性或实性，signet cell？？） 阴性或unknown 据组织类型选择合适技术 新鲜标本 石蜡标本 Ventana IHC 手动IHC检测* ？ 阳性 阴性 FISH RT-PCR? 多重PCR或RACE *: 对于部分无条件行Ventana IHC检测的中心，手动ALK IHC可作为替代的筛选方法 ?: 如果是细胞学样本，推荐使用RT-PCR检测 虚线：建议在富集人群（粘液性腺癌、含印戒细胞成分、不吸烟、年龄60岁）中进行筛选 3+/2+/1+ ALK融合基因阳性非小细胞肺癌 Ventana IHC 试剂设计 ALK融合蛋白: 无ALK重排的NSCLC不表达ALK融合蛋白 部分ALK融合蛋白表达较低 Ventana IHC的原理: 使用具有高度敏感性和特异性的一抗——D5F3 全自动仪操作，充分保证特异性 独有Optiview扩增技术，充分保证敏感性 D5F3 rabbitt monoclonal antibody Optiview DAB IHC Detection Optiview Amplification Kit FISH阳性标本使用IHC检测 全自动Ventana IHC：信号扩增 常规IHC：无信号扩增 D5F3 rabbit mAb Control rabbit mAb ALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHC ALK (+) 病例 ALK (+) 病例 D5F3 rabbit mAb Control rabbit mAb ALK-positive NSCLC by Vysis FISH and Ventana ALK IHC D5F3 rabbit mAb Control rabbit mAb Large majority of positive cases exhibit strong staining. 全自动Ventana IHC 判读标准简单，仅存在阴性 or 阳性的判读 IHC 阳性 = FISH 阳性 EC Minca, et al. J Mol Diag, 2013 Ventana IHC：判读标准简单客观 VENTANA. 1011623EN Rev C.2012; FT0700-410f 临床解释 染色说明 ALK阳性 肿瘤细胞细胞质中存在强颗粒状染色（任何阳性肿瘤细胞的百分比），已知的假阳性染色要排除，包括： 光镜下肺泡巨噬细胞胞质内斑点 神经源性细胞（神经和神经节细胞） 腺上皮细胞染色 腺上皮细胞胞内淋巴侵润 NSCLC患者的正常粘膜组织和坏死肿瘤组织有时也能见到染色颗粒（包括粘液素），这些都应该排除在外 ALK阴性