神经生物学教材2015神经生物研究生教学.pptVIP

2. 神经发生机制——神经干细胞增殖、迁移、分化 脊椎动物胚胎中枢神经系统发生示意图 神经发生及分化过程伴随着细胞分裂方式的变化 神经上皮细胞分裂方式由纺锤体定位决定 神经上皮细胞分裂方式由中心体、细胞命运决定子继承决定 环境因素调控神经祖细胞增殖与分化 允许神经元生存或死亡的分子状态 3. 神经元程序化的细胞死亡 神经系统发育主要过程归纳为 （1）诱导，包括对神经板形成的原发诱导及早期脑脊髓等形成的次发诱导； （2）增殖，包括对原发诱导的反应及作为神经系的某些特殊部分的形态发育和生长的开端； （3）神经元及神经胶质的分化，包括结构分化及功能成熟分化； （4）细胞的迁移； （5）细胞的联系及同类细胞的粘着； （6）神经元间的联系及细胞死亡； （7）细胞群落特殊联系的建立； （8）已建立联系的神经功能的发育。 第三部分：神经干细胞与脑功能再生 1.神经干细胞分类及体内分布 2.神经干细胞来源及鉴定 3.神经干细胞体外分离培养 4.神经干细胞定义及特征 5.神经干细胞应用前景 6.干细胞基本概况及研究现状 人脑不可移植，因此相对于其它器官，干细胞对治疗神经系统疾病犹为重要。 1. 神经干细胞的发现 1989年，Temple等从13天大鼠胚胎脑隔区取出细胞进行培养，发现这些细胞发育成神经元和神经胶质细胞。其后从成年鼠纹状体、海马齿状回处分离出能在体外不断增殖，并具有向神经元和星形胶质细胞分化潜能的细胞群。 Sally Temple. Division and differentiation of isolated CNS blast cells in microculture. Nature，1989，340, 471-473. (Okano et al. 2002) 指具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力，能自我更新并能提供大量脑组织细胞的细胞群。 神经干细胞定义 neural stem cell，NSC 神经干细胞的特征 ★增殖能力 ★自我更新能力 ★多向分化潜能 ★迁移性 ★可塑性 bFGF、EGF BDNF、NT-3 自我更新能力和多向分化潜能是神经干细胞的两个基本特征。 ◆根据部位分类主要有两类： 神经嵴干细胞(neural crest stem cell，NC-SC)：既可发育 为外周神经细胞、神经内分泌细胞和Schwann 氏细胞，也能分化为色素细胞(pigmented cell) 和平滑肌细胞等。 中枢神经干细胞(CNS-NSC)：一般是指存在于脑部的中枢 神经干细胞(CNS-SC)，其子代细胞能分化成为 神经系统的大部分细胞。 2. 神经干细胞分类及体内分布 ◆根据神经系统发育时序分5类发育潜能的神经干细胞 ★神经上皮祖细胞（NEP） ★放射状神经干细胞（R-NSCs） ★神经元能神经干细胞（N-NSCs） ★胶质细胞能神经干细胞（G-NSCs） ★晚期神经干细胞（L-NSCs ） 中枢神经系统发育起始于神经干细胞（NSCs），这个发育阶段称为神经诱导，受时空严密控制。自神经板到成年脑组织，均可分离到具备不同发育潜能的神经干细胞。 各级神经干细胞的特征 神经上皮祖细胞：多能性，致瘤性 放射状神经干细胞：多能性，致瘤性 神经元能神经干细胞：产生神经元，但不产生胶质细胞 胶质细胞能神经干细胞：不仅能产生神经元，亦能产生胶质祖细胞 晚期神经干细胞：神经元分化能力相对于前两者明显下降 ★胚胎期： 　神经干细胞主要分布在大脑的皮层、纹状体、海马、室管膜下层和中脑等区域。 ★成年期： 　中枢神经系统仍有神经干细胞存在，这些细胞平时处于静止状态。成年脑区神经干细胞主要局限在海马齿状回、纹状体和环绕侧脑室的室脑膜下层。 3. 神经干细胞的分布 Shen et al. Cell stem Cell, 2009 4. 神经干细胞体外分离与培养 ★神经球悬浮培养法 ★单层细胞贴壁培养法 Journal of Neuroscience Methods 85 (1998) 141–152. 神经球悬浮培养法 Clive N. Svendsen等采用机械切割法和酶消化相结合的方法，建立了可以长期传代的人神经干细胞系。 Mol. Cell. Neurosci. 38 (2008) 245–258 单层细胞贴壁培养法 2008年，Austin Smith 等建立了单层贴壁法长期传代培养神经干细胞的方法 神经干细胞的鉴定——Nestin 1990年，Lendahl证实，神经干细胞的标志蛋白是神经上皮干细胞蛋白