第03章 萃取分离技术 知识 生物分离工程ppt.pptVIP

第03章 萃取分离技术;3.4.1 双水相系统;双水相系统的典型相图 聚合物：P、Q ;3.4.2 双水相中的分配平衡;其中，KE，KH和KA分别为静电作用、疏水作用和生物亲和作用对分配系数K的贡献。;3.4.3 影响分配系数的各种因素;PEG平均分子量对分配系数的影响 ; 盐的种类和浓度对分配系数的影响主要反映在对相间电位和蛋白质疏水性的影响。 双聚合物系统中，无机离子具有各自的分配系数。 可以看出，不同电解质的正负离子的分配系数不同，因此在两相间形成电位差。由于两相均应各自保持电中性，这对带电生物大分子，如蛋白质、核酸等的分配产生很大影响。 ; 双水相系统：8％PEG4000，8％DexT500；25℃，界面电位为0 ; pH6.9时，溶菌酶带正电，卵蛋白带负电，对照无机离子的分配系数表和式(3-82)，K Cl-＞K Na+，产生电位差，φ2—φ1＞0，1相电位小于2相电位，导致带正电荷的溶菌酶大量迁移到1相，其K值增大；带负电荷的卵蛋白迁移到2相，其K值减少，使溶菌酶和卵蛋白得以较好分离。 ; pH值影响蛋白质的解离度。 调节pH值，可改变蛋白质表面电荷数Z，从而改变分配系数K (式(3－83))。 对一种特定的蛋白质，在不同盐系统中， 由于相间电位Δφ 不同， pH和其分配系数之间的关系曲线也不同，在等电点处，Z＝0，得到的均为不带电时的分配系数 [＝K0，式(3－83)]，即两条关系曲线交于一点。; BSA的交错分配曲线，箭头所指为交点处的pH和K值 4.4％PEG 6000／7％Dex T—500，20℃ (O) 0.1mol／L NaCl； (●)0.05mol／L Na2SO4; 大规模双水相萃取一般在室温下操作，不需冷却。;3.4.4 双水相萃取操作;;从细胞匀浆液中双水相萃取胞内酶; 萃取在混合澄清槽或萃取塔中进行： 将固状(或浓缩的)聚合物和盐直接加入到细胞匀浆液中，同时进行机械搅拌使成相物质溶解，形成双水相。由于常用的双水相系统的表面张力很小(如PEG／盐系统为0.1 ~1mN／cm；PEG／Dex系统为1×10-4~0.1mN／cm)，相间混合所需能量很低，通过机械搅拌容易分散成微小液滴，相间比表面积极大。达到相平衡需时间很短，一般只露几秒钟。搅拌时只需较小的剪切力就能得到分散度很高的悬浮液，能耗小。 ;4．萃取实例;连续??水相萃取流程; 向有机溶剂中加入表面活性剂，当表面活性剂的浓度超过一定值时，在有机溶剂中也会形成微团。其疏水性的非极性尾部向外，指向非极性溶剂，而极性头向内，与在水相中形成的微胶团方向相反， 称为反微团。微团或反微团的形成均是表面活性剂分子自聚集的结果，是热力学稳定体系。;反微团示意图; 表面活性剂是构成反微团的必要条件：阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂。; 含水率(water content)一般用有机相中水与表面活性剂的摩尔比来定义：;3.5.2 反微团的溶解作用;反微团萃取中分配系数K的影响因素;反微团溶解蛋白质模型; 生物分子溶解于反微团相的主要推动力是表面活性剂与蛋白质的静电相互作用。反微团与生物分子间空间相互作用和疏水性相互作用对生物分子的萃取率也有影响。 ;pH对蛋白质溶解率的影响 AOT＝50mmol／L;2．空间相互作用 ; 1. 蛋白质溶解方式;(1)有机相助溶剂 (2)表面活性剂和助表面活性剂 (3)盐的种类 ;3. 反微团萃取过程示例; 下图所示的体积液膜装置中进行蛋白质的反微团萃取，其特点是萃取与反萃取同时进行。; 反微团液膜萃取实验结果 (□)胰凝乳蛋白酶；(O)溶菌酶 W1：KCl＝0.25mol/L，pH5.0 W2：KCl ＝0.7mol/L ，pH11.3 反微团相(RM)：50mol/L AOT／异辛烷;6．双水相萃取体系是如何形成的？其特点如何？ 比较溶剂萃取法和双水相萃取法的异同点。 8. 在恒温恒压条件下，影响物质在PEG/Dex双水相体系中分配的因素有哪些? 9．双水相萃取在生物工程领域的应用前景，举例说明。 10．反胶团有哪些有用的特性可用于生物物质的分离? 11．请比较超滤技术和反胶团萃取技术在蛋白质分离上各自的优势和缺点。 12．将反胶团萃取技术与其他蛋白质分离技术相比较，指出它们各自的适用场合?;习 题