- 1、本文档共7页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
传统乳制品中降胆固醇作用乳酸菌分离研究
传统乳制品中降胆固醇作用乳酸菌的分离研究
摘要:文章从中国传统乳制品中分离得到5株乳酸菌纯菌株。通过邻苯二甲醛法测定了每株菌株对培养基中胆固醇的降解能力,其降解率分别为18.4%、50.2%、15.4%、26.9%、24.1%。并通过对降解率最高的菌株L2进行了形态观察、生理生化实验、鉴定及16S rRNA序列分析等研究,鉴定其为干酪乳杆菌。
关键词:中国传统乳制品;降胆固醇作用;乳酸菌
中图分类号:S571 文献标识码:A 文章编号:1674-0432(2011)-06-0097-2
1 材料方法
1.1 材料
1.1.1样品采集 本研究的乳制品样品均采集于内蒙古海拉尔地区的牧民家庭中。将采集到的传统乳制品保存与灭菌管中,低温运回实验室,置4℃冰箱备用。
1.1.2 仪器 Olympus光学显微镜,超净工作台、厌氧培养箱、Eppendorf全自动高压灭菌锅、梅特勒电子天平、吉尔森移液器、Eppendorf冷冻离心机、GeneQuant100紫外分光光度计、
1.1.3 主要试剂及配制方法 胆固醇、溶菌酶、蛋白酶K、Taq酶、dNTP;16S rRNA引物合成于英潍捷基贸易有限公司;MRS培养基参照《常见细菌系统鉴定手册》中所提供的方法进行配制。MRS-CHOL高胆固醇培养基的配制方法:准确称取1.0g胆固醇,溶于100mL无水乙醇中,此时,溶液浓度为10.0g/L。向100mL MRS液体培养加入1mL 10.0g/L的胆固醇溶液,胆固醇在培养基中的最终浓度约为100mg/L。
1.2 方法
1.2.1 中国传统乳制品中乳酸菌的初筛 将采集的传统乳制品样品于MRS固体培养基平板上划线,置厌氧培养箱中,37℃培养48h。挑选出不同形态的菌落重复划线,于37℃厌氧培养箱中培养24h,重复几次,直至分离得到纯化的乳酸菌。将纯化的乳酸菌菌株穿刺接种在MRS半固体培养基中,37℃厌氧环境下培养24h,保存于4℃备用。
1.2.2 降胆固醇乳酸菌的筛选 胆固醇含量的测定采用邻苯二甲醛法[5]。将分离得到的纯菌株分别接种与MRS培养基中活化2-3代,取1mL菌液接种于5mLMRS-CHOL培养基中,摇匀后立即离心,取上清测定胆固醇的含量。然后混匀,将其置37℃厌氧培养箱中培养24h,离心,取上清测定胆固醇的含量。将同一株纯化菌株同时做10个平行实验,求该菌株的胆固醇降解率的平均值。
胆固醇的降解率=(对照组胆固醇的含量-发酵后胆固醇的含量)/对照组胆固醇的含量。
1.2.3 降胆固醇乳酸菌的生理生化实验 镜检观察具有胆固醇降解作用的乳酸菌的菌体形态,观察平板培养菌落的形态,进行革兰氏染色和触酶实验,对菌株进行初步鉴定。将该菌株接种于糖发酵管中,37℃厌氧培养24h后观察实验结果,对该菌株的属、种进行鉴定。
1.2.4 16S rRNA的分子鉴定 提取筛选到的具有胆固醇降解作用的乳酸菌的基因组DNA,以其为模板,利用细菌16S rRNA的通用引物(Forward Primer:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′;Reverse Primer:5′-AAGGAGGTGATCCAGCC-3′)进行PCR扩增。扩增体系见表1。
PCR扩增的反应条件:94℃预变性3min,94℃变性30s,53℃退火30s,72℃延伸60s,30个循环后,72℃延伸10min,4℃保存。PCR产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测,并委托天一辉远生物科技有限公司测序。测得序列在NCBI上进行BLAST,与GenBank中的乳酸菌标准株的16S rRNA序列进行同源性比对。
2 结果与分析
2.1 中国传统乳制品中乳酸菌的初筛结果
经过划线纯化,本研究从中国传统乳制品中筛选到5株纯化的乳酸菌菌株,分别命名为L1、L2、L3、L4、L5。
2.2 降胆固醇乳酸菌的筛选结果
5株乳酸菌都具有一定的降胆固醇能力,但是菌株之间差异较大。对照组的胆固醇含量为95.3mg/L,L1、L2、L3、L4、L5的发酵上清中平均胆固醇含量分别为77.8mg/L、47.5mg/L、80.6mg/L、69.7mg/L、72.3mg/L,降解率分别为:18.4%、50.2%、15.4%、26.9%、24.1%。其中,菌株L2的降胆固醇能力最强,降解率达到50.2%,在10次重复实验中,数据没有较大的波动,活性比较稳定。
2.3 菌株L2的形态和菌落特征
该菌株革兰氏染色结果呈现阳性,镜检观察菌体为杆状,单个或链状排列。菌落直径为0.5-1.0mm,边缘整齐,表面光滑,呈乳白色。初步鉴定该菌株为乳酸杆菌属。
2.4 菌株L2的生理生化实验结果
您可能关注的文档
- 会计电算化环境下内部控制问题研究.doc
- 会计电算化环境下对内部控制制度思考.doc
- 会计电算化环境中档案管理.doc
- 会计电算化系统安全防范存在问题及对策.doc
- 会计目标与合并理论选择.doc
- 会计研究方法体系“双轨制”改革.doc
- 会计社会责任问题研究.doc
- 会计稳健性原则在我国上市公司中运用.doc
- 会计稳健性原则在我国演变与发展.doc
- 会计稳健性度量研究综述.doc
- 中国国家标准 GB/T 18233.4-2024信息技术 用户建筑群通用布缆 第4部分:住宅.pdf
- GB/T 18233.4-2024信息技术 用户建筑群通用布缆 第4部分:住宅.pdf
- GB/T 18978.210-2024人-系统交互工效学 第210部分:以人为中心的交互系统设计.pdf
- 《GB/T 18978.210-2024人-系统交互工效学 第210部分:以人为中心的交互系统设计》.pdf
- 中国国家标准 GB/T 18978.210-2024人-系统交互工效学 第210部分:以人为中心的交互系统设计.pdf
- GB/T 16649.2-2024识别卡 集成电路卡 第2部分:带触点的卡 触点的尺寸和位置.pdf
- 《GB/T 16649.2-2024识别卡 集成电路卡 第2部分:带触点的卡 触点的尺寸和位置》.pdf
- 中国国家标准 GB/T 16649.2-2024识别卡 集成电路卡 第2部分:带触点的卡 触点的尺寸和位置.pdf
- GB/T 17889.4-2024梯子 第4部分:铰链梯.pdf
- 《GB/T 17889.4-2024梯子 第4部分:铰链梯》.pdf
文档评论(0)