基质细胞衍生因子sdf1的新受体cxcr7对内皮祖细胞调节作用的初探-preliminary study on the regulatory effect of cxcr 7, a new receptor of stromal cell derived factor sd f1, on endothelial progenitor cells.docx

摘要内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）由骨髓释放到外周血，参与病损伤区域的血管新生是治疗血管生成相关疾病的重要途径。EPCs 从骨髓中动 员、迁移、归巢到血管新生部位，参与血管生成过程中受到外源信号和内在因素 的级联动态调节。基质细胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）就 是一种重要的细胞的外源信号趋化因子，与其受体结合后能调控许多重要的生物 反应过程。CXCR7(chemokine (C-X-C motif) receptor 7 )是近年来发现的 SDF-1 的 新受体，但是 SDF-1/ CXCR7 是否参与调控血管生成过程国内外的相关文献报道几 乎没有。本研究以 EPCs 为切入点，体外考察 SDF-1/ CXCR7 对内皮祖细胞增殖、 迁移、黏附和凋亡过程的影响，探讨 CXCR7 在 SDF-1 调控 EPCs 动员、归巢过程 中扮演的角色，初步探索其作用机理，以便论证以 CXCR7 为靶标进行促进或抑 制血管生成的可能性，以期为血管新生的诊断及相关疾病的治疗提供新的理论依 据。本文的主要研究内容和结果如下：① 用密度梯度离心法分离大鼠骨髓单个核细胞，经 EBM-2 培养基培养呈现 “星型集落”等典型结构，通过内皮祖细胞特异性标志 CD31 和 VE-cadherin 以及 Ac-LDL 和 UEA-1 鉴定，证明骨髓来源的单个核细胞可体外诱导成为功能性的 EPCs。② 用 Reverse transcription-PCR 和 western-blot 免疫印迹法检测 EPCs 细胞中 CXCR4(chemokine (C-X-C motif) receptor 4)和 CXCR7 的表达情况；用 MTT 法测 定分别用抗体阻断 CXCR4、CXCR7 后，对 EPCs 细胞增殖率的影响；通过 transwel 小室体外侵袭迁移实验检测 anti-CXCR4 和 anti-CXCR7 对 EPCs 细胞趋化活性的影 响。用 CXCR4 和 CXCR7 抗体分别预处理 EPCs 细胞后，考察其与单层 HUVEC 细胞黏附作用；通过流式细胞仪检测 anti-CXCR4 和 anti-CXCR7 对经低浓度双氧 水预处理后 EPCs 细胞活性的影响。结果表明：EPCs 细胞中都表达 CXCR4 和 CXCR7 这两个受体。用 CXCR7 抗体封闭后，EPCs 细胞的增殖活力显著下降。 CXCR7 抗体对 SDF-1 诱导的 EPCs 细胞迁移影响不显著。CXCR4 与 CXCR7 抗体 都会抑制 EPCs 细胞与 HUVEC 细胞单层的黏附，CXCR7 抗体抑制效果更明显。 SDF-1 主要通过 CXCR7 有效保护 EPCs，抑制 EPCs 凋亡。结论：SDF-1 对内皮祖细胞的增殖、迁移、黏附和凋亡有直接的促进作用， CXCR7 在其中起着与 CXCR4 不完全相同、但相互协同的重要作用。抗体阻断 CXCR7 能够抑制 EPCs 细胞的增殖、迁移、粘附和凋亡，表明 CXCR7 有作为心血 管疾病治疗靶标的潜力。关键词：基质细胞衍生因子-1，CXCR7，CXCR4，内皮祖细胞ABSTRACTEndothelial progenitor cells (endothelial progenitor cells, EPCs) from the bone marrow release into the peripheral blood, disease damage region involved in angiogenesis treatment of angiogenesis-related diseases, an important way.Mobilization of EPCs from the bone marrow, migration, homing to sites of angiogenesis, the process involved in angiogenesis by exogenous signals and internal factors of the cascade dynamic regulation. Stromal cell-derived factor -1 (Stromal cell-derived factor-1, SDF-1) is an important signal of cells exogenous chemokine binding to its receptor can regulate many important biological rea