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第十二章 微生物工程 生 产 举 例 提纲 第一节 抗生素生产工艺 第二节 柠檬酸生产工艺 第三节 啤酒生产工艺 第四节 氨基酸生产工艺 第五节 污水的生物处理 第一节 抗生素生产工艺 重点： 抗生素的生物合成；微生物的次级代谢与初级代谢的关系；抗生素生物合成的代谢调节机制；细胞生长期到抗生素产生期的过渡；酶的诱导作用；分解代谢产物的调节控制。 难点： 抗生素生物合成的代谢调节机制；分解代谢产物的调节控制。 概 述 抗生素是微生物产生的具有生物活性的物质，它不但可以抑制其他微生物的发育与代谢，有的还可以抑制癌的发育与代谢，及具有抗血纤维蛋白溶酶作用。 抗生素是人们使用最多的药物，也是制药工业中利润最高的产品。世界各国由发酵法生产的抗生素约400种，广泛应用的仅120种，其他主要是毒性大、成本高，无商业应用价值。 抗生素生产为近代微生物技术中最大产业之一，世界产量超过35000吨，不但在经济上占有重要位置，且为人类健康作了出巨大贡献。 一、抗生素的分类 按生物来源、作用、化学结构、作用机制、合成途径可分为：表22-1 二、抗生素生产工艺 生产方法： 1、生物合成法： ①传统方法 ② “工程菌”制造法 ③细胞融合技术法 2、化学合成法； 3、生物合成加化学合成法。 二、抗生素生产工艺 1、生物合成法： ①传统方法 大多数抗生素是由放线菌和霉菌产生的。菌种是通过从土壤中分离、筛选获得，一般采用深层通风搅拌发酵罐生产。 传统方法目前存在很多不足，因此，人们采用基因工程和细胞融合技术，对抗生素产生菌进行了改造和重新设计，不仅可以制造出许多高效低毒的新型抗生素，还可改革工艺，使抗生素产量成倍地增长。 二、抗生素生产工艺 1、生物合成法： ② “工程菌”制造法 第一次由“工程菌”制造的全新抗生素—麦迪紫红素A，是美国报道的。他们将产放线紫红素的部分基因插入产麦迪霉素的放线菌中，构建的“工程菌”产生了全新的抗生素。 我国新构建的生产丁胺卡那霉素的“工程菌”，就是把酰化酶基因克隆到卡那霉素产生菌中获得的。新的“工程菌” 生产的新抗生素毒副作用小，对耐卡那霉素、庆大霉素致病菌临床疗效显著。 二、抗生素生产工艺 1、生物合成法： ③细胞融合技术法 对抗生素产生菌采用细胞融合技术的成果更为突出。橄榄色无孢小单孢菌细胞融合株抗生素产率比原菌株提高100倍。 目前DNA重组技术已广泛用于红霉素、链霉素等20多种抗生素的育种工作，可以预见不久将来会有更多的由“工程菌”生产的新型抗生素问世。 二、抗生素生产工艺 2、化学合成法 根据某种抗生素的化学组成和结构，通过化学合成的方法，可生产部分抗生素。 如：氯霉素、磷霉素等。 经过化学合成方法和控制条件的不断深入研究，越来越多的抗生素可用化学合成法生产。 二、抗生素生产工艺 3、生物合成加化学合成法 许多细菌逐渐出现了抗药性，已经证实某些抗药性因子位于细菌内的质粒上，质粒可以在细菌之间转移，结果抗性菌日益增多，抗生素疗效就越来越低。 为了对付细菌的抗药性，科学家对原有的抗生素进行了“整容手术”，细菌因再无法识别改头换面的抗生素而被抑制或杀死。 现在已能使用克隆了酰化酶基因的“工程菌”（大肠杆菌）高效率的生产半合成抗生素。临床现在使用的贵重特效药物先锋霉素（头孢菌素类）、氨苄青霉素，就是这类半合成抗生素类药物。国外已有几十种这类药物在实验室研制成功。 三、青霉素生产工艺 三、青霉素生产工艺 三、青霉素生产工艺 1、菌种：产黄青霉 生长发育分六个阶段： Ⅰ—Ⅳ期：菌丝生长期，适宜做种子； Ⅳ—Ⅴ期：青霉素分泌期； Ⅵ期：菌丝体自溶期。 三、青霉素生产工艺 2、培养基： 碳源：乳糖、蔗糖、葡萄糖等； 氮源：玉米浆、麸皮粉、无机氮源； 前体：苯乙酸或苯乙酰胺；（一次﹤0.1％） 无机盐：S、P、Ga、Mg、K等。 铁离子有害， 控制在﹤30μg/mL。 三、青霉素生产工艺 3、发酵条件控制 补糖：残糖降至0.6％（PH上升）； 补氮：氨氮0.05％，补硫铵、氨水或尿素； PH：6.4—6.6，加糖、加酸、加碱调节； 温度：前期，25-26℃；后期， 23℃； 通气比：1：0.8