bio-rad核酸蛋白测定仪操作规程-厦门大学医学院.docVIP

核 酸 蛋 白 测 定 仪 操作规程 BIO-RAD SmartSpecTM plus 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2017年3月 正式操作仪器之前请注意如下事项： 首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。 查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不要开机使用。 查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内空调，检查并清空除湿机水箱。 查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候10分钟以上再开机使用。 一、开机 打开仪器电源开关，仪器进行自检，显示屏显示主界面。 二、仪器操作 点击操作界面上按钮，选择目标程序： DNA/RNA、 Protein、 Scan、 Kinetics、 OD600、 λ A. DNA/RNA 1、选择检测物质类型(dsDNA、ssDNA、RNA、DNA oligo a、按Select选择检测物质dsDNA, ssDNA或RNA，enter 接受或者修改换算因子： dsDNA: A260 1.0=50ug/ml ssDNA: A260 1.0=37ug/ml RNA: A260 1.0=40.00ug/ml b、按Select选择DNA寡核苷酸或RNA寡核苷酸，enter 输入摩尔消光系数(molar extnctn coefficient)和分子量(molecular weight)， 或者，选择系统自带方法计算摩尔消光系数和分子量， 只需输入序列(sequence)、长度（length）或组成（composition），SmartSpec Plus会以g / ml和pmol / l为单位显示出样品浓度，并计算摩尔消光系数和分子量。 2、将装有空白溶液的比色皿放入测定仪中，按Read Blank 键，获得吸收值。然后将样品放入到测定仪中，按Read Sample 键，获得数据。 3、测定后光吸收和浓度数据会自动显示出，如果还有其它波长检测的数据，按Abs 键查看即可。DNA oligo、RNA oligo浓度以μg/m或pmol/μl为单位，按Conc 键进行两种单位的转换。按A260/A280 键查看DNA、RNA纯度。如果稀释因子不是1.0，按Dilution Factor 键设定稀释因子。 4、光吸收或浓度值显示出来之后，按Enter键返回到Ready界面，或直接放入下一个样品按Read Sample继续读数。测定完成后，按左箭头键退出程序，并打印数据报告。 B.蛋白质protein 1、选择检测方法 Bradford：检测595 nm吸光度 Lowry：检测750 nm吸光度 BCA：检测562 nm吸光度 UV：检测260、280、320 nm吸光度 其它：用户指定吸收波长 2、选择是否扣除背景。如果是，选择指定背景波长，背景波长离测定波长约±200-300nm 3、选择制作标准曲线 a、新建一个标准曲线 输入空白重复数目，依次放入空白样品，按Read Blank 输入标样梯度数目 选择标样浓度单位 选择标样是否有重复，重复数目是否相同，输入每个标样重复数目 然后输入第一个标样浓度，放入第一个标样，按Read Sample键读取数据。 依次将所有标样读取完成后，选择是否调整标曲，是否查看标曲信息，选择是否保存标曲。 b、使用原有标准曲线 c、无标准曲线。SmartSpec Plus系统不能将吸光度转换成浓度 C.波长扫描Scan 1、设置扫描上限、下限（系统工作波长范围200-800 nm） 2、选择是否扣除背景。如果是，选择指定背景波长，背景波长离测定波长约±200-300nm 3、选择快速扫描或慢扫描 4、对于快速扫描，选择连续扫描次数 D.动力学分析Kinetics 1、选择需要收集的波长 2、选择数据收集时间 3、选择连续收集时间间隔 4、选择是否扣除背景。如果是，选择指定背景波长，背景波长离测定波长约±200-300nm E.OD600 菌液浓度测定 1、接受或者修改换算因子(A600 1.0=5.00e008cell/ml) 2、将样品放入样品仓，按Read Sample键读取数据。重复本步骤直到所有样品吸光度收集完毕 F.λ 1、选择需要收集的波长数目 2、指定收集的波长 3、选择是否扣除背景。如果是，选择指定背景波长，背景波长离测定波长约±200-300nm 三、关机 关机前请查看放在实验台上的刷卡机“日历”，如紧接着有其他人员将使用该仪器，请不要关闭电源，联系后面使用者。 无人接着使用，则关闭仪器左后方的电源开关