beamcyte流式细胞仪快速操作.pdfVIP

BeamCyte 流式细胞仪快速操作指南 流程 开机 QC测试 新建实验 荧光补偿 采集样本 分析数据 关机 开机 首先打开电脑，电脑正常开机后打开仪器后面板电源键启动仪器，在配套电脑上打开 Cytosys 软件，待仪器初始化完成，软件状态栏将显示 “ 就绪”，即可进行下一步 操作。 QC 测试 1 制备BeamCyte QC 微球悬液。 2 点击主菜单“系统维护”→“QC 测试” ，根据软件提示完成QC 测试。 3 QC 测试所有项目结果均为 Pass 时，可进行下一步操作。 新建实验 1 点击主菜单“文件”→“新建”→“新建实验”，建立新的实验文件。 2 用以下多种方式新建实验样本或标本： 在“实验管理”面板，右键点击“实验文件名”，在本实验文件下新建标本。右键 点击“标本”，在选中的标本下新建样本。 如果已有模板文件，点击主菜单“文件”→“新建”→“从模板新建”，将新建有相同 模板的标本或样本。 3 点击主菜单“文件”→“保存”，保存选中的实验文件或其他文件。 注：如果已导出fcs 文件，文件名会变色。 荧光补偿 1. 自动荧光补偿  准备各个荧光参数的单染样本和未染色对照样本。  点击菜单“开始”→“自动补偿”，弹出“新建自动补偿”对话框，进行自动补偿 条件设置。  选择需要使用的样本，并点击“确定”。软件将自动新建“补偿标本”。  逐管采集单染样本，软件自动计算荧光补偿。  将自动计算的荧光补偿右键导出保存。 2.手动荧光补偿 两种方式手动调节荧光补偿：  需要补偿的参数两两做密度图，点击快速补偿按钮 ，拖动快速补偿滚动条，使 某一荧光单阳性细胞与阴性细胞在另一荧光通道的荧光强度相等。逐个调节直到所 有参数之间的补偿完成。 补偿前 补偿后  补偿调节的过程也可以通过点击菜单“开始”→“当前补偿”调出当前样本的补偿 矩阵，不断调整溢出矩阵中相应单元格的补偿系数来实现。 采集样本 1 在“实验管理”面板，双击试管，使之成为当前试管（蓝色箭头指示 ）。 2 设置采集条件：  设置采集使用的“参数”， ，包括选择采集通道并定义别名和电压，初次实验 的电压需用调试模式调整。 注：参数多少会影响最终文件大小。  设置实验“停止条件”。  设置实验“样本流速”。 注：时间允许建议使用低速，可提高信号分辨率。  设置“阈值”。FSC-H 大于 100,000 的阈值条件，可满足大部分原代细胞和细胞系 的实验需要。细菌和血小板等特别小的细胞则建议将阈值设为FSC-H 大于10,000。 结合第二阈值条件可以更好地消除细胞碎片对实验的影响。 3 将样本管充分混匀，置于样本架。 4 点击“RUN”按钮 执行样本采集。此时样本针会向下运动至样本管内，吸取一定体积 的样本后收回。 注：样本采集过程中，请勿将手伸到样本针下方，请勿遮挡样本针位置。 注：采集条件也可以通过导入已有同类型试管或标本或实验的“仪器设置”模板的方式 实现。 分析数据 1.画图 1 选择点击 （散点图）、 （密度图）、 （柱状图）或 （等高线图） 图标做图。图形显示当前样本的数据。 2 图形的放大和缩小。  点击“放大” ，在图形上拖动鼠标，可将图形放大到鼠标拖动的范围。  点击“缩小” ，在图形上点击鼠标，可将图形缩小，多次点击，逐步缩小。  点击“自动范围” ，自动将图形显示为默认范围。  点击“坐标轴范围” ，可设置坐标轴的显示范围。 放大前