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染色体微缺失检测 MicroRead/ Y Y染色体微缺失 2 1 3 5 背景知识 缺失原理 临床应用 检测技术 同类对比 4 6 成本收益 背景知识 　　根据国际卫生组织（WHO）调查，约15%育龄夫妇存在生育障碍，其中男性因素引起的生育障碍约占一半。 　　遗传因素占男性不育的30%，发病率最高的两种是Y染色体的微缺失和克氏综合症。 Y染色体微缺失在无精症或少精症患者中发病率在10-15% 1 1976年，Tieplolo和Zuffardi发现无精症患者有Y染色体长臂(Yq11)缺失，故称该部位为无精子因子(azoospermia factor，AZF)。目前认为控制精子生长的基因位于Y染色体长臂远侧的常染色质区，该部位有无精子因子AZF，现已明确至少有3个精子生成部位(AZFa、AZFb、AZFc)，分别位于Yq11的近端、中间和远端。 由于不同实验室采用 P C R方法不同,导致实验结果各异。为提高诊断质量，欧洲男科协 会( E A A ) 和欧洲分子遗传实验质控网( EMQN) 在 1999 、2004年先后颁布了第 1版和第 2版 Y染色体 微缺失分子诊断指南，规范了检测微缺失时的Y 染色体序列标签点( s e q u e n c e t a r g e t e d s i t e s ，STS )与所采用的内外对照方法。 选择位于 Y染色体短臂 ( Yp ) 的睾丸决定基因( S RY ) 和锌指蛋白基因( ZFX ／ZFY ) 为对照。ZFX ／ZFY既存在于 x染色体短臂，也存在于 Yp ，其与 SRY一起构成2个 目前推荐使用 的参照基因。每个 AZF区域至少设置2个STS位点才能正确有效. 其推荐的 检测位点S T S为： A Z F a ： s Y 8 4， s Y 8 6： A Z F b： s Y 1 2 7， s Y 1 3 4； A Z F c ： s Y 2 5 4， s Y 2 5 5 。 AZFa缺失患者 33%为严重少精子, 67%表现为无精子； AZFb缺失患者 9%轻度少精子, 23%严重少精子 , 68%无精子； AZFc缺失患者 46%严重少精子 , 54%无精子； Y染色体微缺失 2 1 3 5 背景知识 缺失原理 临床应用 检测技术 同类对比 4 6 成本收益 缺失原理 2 缺失率最高的三个影响精子发生的区域被命名为 AZFa，AZFb和AZFc，它们之中任何一个出现缺失都有可能导致育性下降或不育。 Y染色体具有大量重复基因序列及回文结构，这些结构在维持Y染色体进化稳定性的同时也使回文结构内部基因易于丢失，进而导致不育。 AZFa区两端有两段原病毒序列、AZFb/c区内部有5个序列高度一致的大的回文结构。这些序列和结构导致相应染色体片段易发生同源重组，造成缺失或复制。 Y染色体微缺失 2 1 3 5 背景知识 缺失原理 临床应用 检测技术 同类对比 4 6 成本收益 无精症、少精子症患者病因排查； 男性不育症患者选择体外受精（IVF）或单精子卵泡浆内注射（ICSI）生育前； 精子库对精子进行遗传背景筛查； 男性不育伴隐睾和精索静脉曲张或其他原因不明的不育症患者病因排查； 妻子为不明原因的习惯性流产患者的病因排查。 临床应用 3 Y染色体微缺失 2 1 3 5 背景知识 缺失原理 临床应用 检测技术 同类对比 4 6 成本收益 检测技术 琼脂糖检测 EAA及 EMQN推荐检测方法，技术较成熟，基本满足95%的临床检测。 测序仪检测 检测位点较全，包含a/b/c区域缺失及部分缺失， 多应用于科研。 荧光定量检测 多处于研究阶段，基本不太稳定 4 Y染色体微缺失 2 1 3 5 背景知识 缺失原理 临床应用 检测技术 同类对比 4 6 成本收益 同类对比 产品性能 透景（琼脂糖）： 检测6个位点，需要提取DNA，2管扩增，耗时1天。 亚能（琼脂糖）： 检测15个位点，需要提取DNA，4管扩增，耗时1天。 阅微（琼脂糖）： 检测6个位点，无需提取DNA，1管扩增，耗时3小时。 阅微（测序仪）： 检测17个位点，需要提取DNA，1管扩增，耗时1天。 5 结果判读 透景（琼脂糖）示例图片： 泳道1为A组正常对照 泳道2为样品sY254缺失 泳道3为样品sY127缺失 泳道4为空白对照泳道5为B组正常照? 泳道6为样品sY255缺失泳道7为样品sY134失 泳道8为Marker 结论：每次结果判读时均需对比说明书