第6讲溶剂萃取.ppt

第63页/共77页 (3) 离子强度 离子强度增加，减小了蛋白质的表面电荷与微胶团内表面电荷的相互作用，从而降低蛋白质在胶团中的溶解度。 陆九芳p127－320 第64页/共77页 4. 胶团萃取分离过程 (1) 制备含蛋白质的反向微胶团的三种方法 相转移法：将含蛋白质的水相和含表面活性剂的有机溶剂相接触，在缓慢搅拌下，部分蛋白质转入（萃入）有机相。此过程较慢，最终得到的含蛋白质有机相是稳定的。 注入法：向含表面活性剂的有机相中注入含蛋白质的水溶液。此过程较快，操作也很简单。 溶解法：适用于水不溶蛋白质。将含水的反向微胶团的有机溶液与蛋白质固体粉末一起搅拌。 第65页/共77页 第66页/共77页 (2) 实例：胶团萃取分离3种蛋白质（核糖核酸酶、细胞色素C、溶菌酶） 表面活性剂：AOT；有机相：异辛烷 利用离子强度和pH值调节蛋白质的溶解度差异。 pH=9,[KCl]=0.1M时，核糖核酸酶不溶于胶团，而留在水相。 进入有机相胶团中的细胞色素C和溶菌酶用pH=9,[KCl]=0.5M的水溶液反萃取，只有细胞色素C进入水相。 仍留在有机相中的溶菌酶再用pH=11.5,[KCl]=2.0M的水相反萃取。 第67页/共77页 陆九芳p128－323 第68页/共77页 6.6 双水相萃取 1896年Beijerinck发现： （明胶＋琼脂）或 （明胶＋可溶性淀粉） 混浊不透明溶液 两个有界面的液相 两相的主成分都是水 上相 富含明胶 下相 富含琼脂 （或淀粉） 第69页/共77页 等体积的2.2%葡聚糖与0.72%的甲基纤维素的水溶液形成的双水相体系 上相： 0.39%葡聚糖 0.65%甲基纤维素 98.96%水 下相： 1.58%葡聚糖 0.15%甲基纤维素 98.27%水 第70页/共77页 几类双水相体系 聚合物－聚合物－水： 聚丙稀乙二醇－甲氧基聚乙二醇 聚乙二醇－聚乙烯醇 高分子电解质－聚合物－水： 硫酸葡聚糖钠盐－聚丙稀乙二醇 羧甲基葡聚糖钠盐－甲基纤维素 高分子电解质－高分子电解质－水： 硫酸葡聚糖钠盐－羧甲基纤维素钠盐 硫酸葡聚糖钠盐－羧甲基葡聚糖钠盐 聚合物－低分子量组分－水： 聚丙稀乙二醇－磷酸钾 甲氧基聚乙二醇－磷酸钾 聚丙稀乙二醇－葡萄糖 表面活性剂－表面活性剂－水： 第71页/共77页 生物物质在双水相体系中的分配 生物样品的复杂性 ?分配机理的复杂性 包括可溶性物质（蛋白质、核酸）、悬浮颗粒（细胞或细胞器）； 各种物质的大小、形状和性质不同； 存在形式不同（离解状态、聚集状态） 分配机理的解释 界面张力作用 电位差作用（Donnan效应） 第72页/共77页 界面张力作用 微小粒子在液体中由于热运动而随机分布，界面张力的影响使它呈不均匀分布，并聚集在双水相体系中具有较低能量的一相中。 电位差作用 带电大分子（粒子）在两相中分配时，会在两相产生电位—Donnan效应。Donnan效应使得某些物质选择性地通过Donnan膜，即某种（类）物质在某相富集。 第73页/共77页 影响分配的因素 聚合物的组成和