转基因玉米59122品系的特异性检测.pdfVIP

※分析检测 食品科学 2011, Vol. 32, No. 04 139 转基因玉米59122 品系的特异性检测 1,2 2 1 1,2 1 1,2 1,2 , 许文涛 ，杨 蓉 ，陆 姣 ，张 南 ，罗云波 ，何 景 ，黄昆仑 * ( 1.中国农业大学食品科学与营养工程学院食品安全实验室，北京 100083 ； 2.农业部转基因产品检验监督测试中心(北京) ，北京 100083) 摘 要：使用反向聚合酶链式反应(PCR)技术克隆了转基因玉米59 122 的外源基因与玉米基因组之间的两段侧翼序 列，并据其左侧侧翼序列设计了具品系特异性的引物，运用半巢式P CR 技术建立了59 122 的品系特异性二重P CR 检测方法，扩增片段10 0 b p ，横跨p a t 终止子与转基因玉米侧翼基因之间。以转基因玉米5 9 12 2 、M O N 8 6 3 、 MON 8 10 、GA2 1、N K 6 03 ，转基因大豆Roun dup Ready 和转基因油菜GT7 3 等为材料，证明本方法与其他转基 因作物具有高特异性。本方法在检测59 122 时，确定出连接体系中线性DNA 的最佳质量浓度为1n g/ μL 左右，检 出限达到0 . 1% ，灵敏度为3 8 个单倍体基因组拷贝数。因此可准确、快速、高效地检测转基因玉米及其产品，或 作为常规P CR 定性检测后的验证方法。 关键词：转基因作物；品系特异性检测；半巢式聚合酶链式反应；反向聚合酶链式反应；二重聚合酶链式反应 Event-specific Transgenic Detection of Genetically Modified Maize 59122 with Flanking Sequence 1,2 2 1 1,2 1 1,2 1,2, XU Wen -tao ，YAN G Rong ，LU Jiao ，ZHANG N an ，LUO Yun-bo ，HE Jing ，HUANG Kun -lun * 　(1. Food Safety Laboratory, College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beij ing 100083, China ；2. Supervision , Inspection and Testing Center of Genetically Modified Organisms (Beij ing), Ministry of Agriculture, Beij ing 100083, China) Abstract：We report the cloning of two flanking sequence of the integrated gene construct of genetically modified maize 59 122 by inverse PCR method and the design of even-specific primers based on the left flanking sequence with the aim o