the special topic of amino acid extraction constant 分子生物学教材.pptVIP

蛋白质一级结构测定前的准备工作：Ⅳp105、Ⅲp96 样品的纯度在97％以上； 测定蛋白质的相对分子量； 测定肽链的数目； 测定氨基酸的组成——小片段重叠的原理;蛋白质一级结构的测定步骤： 1、末端分析 N－末端测定 Sanger法 Edman法 DNS法 氨肽酶法;2、肽链的拆开与分离 －S－S－：过甲酸或巯基乙醇等巯基化合物 非共价键：尿素、盐酸胍等蛋白质变性剂;Sanger反应测定蛋白质N末端;Edman反应测定蛋白质N末端： 此法能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸 残基逐一进行标记和解离。; 酶;习 题 1： 由下列信息求八肽的序列。 （a）酸水解得Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val （b）Sanger试剂处理得DNP-Ala。 （c）胰蛋白酶处理得Ala，Arg，Thr和Leu，Met， Phe，2 Val；当以Sanger试剂处理时分别得到 DNP-Ala和DNP-Val。 （d）溴化氰处理得Ala、Arg、高丝氨酸内酯、Thr、 2 Val和Leu、Phe；当用Sanger试剂处理时， 分别得DNP-Ala和DNP-Leu。; 解 析： 由（a）可知此肽的氨基酸组成Ala，Arg，Leu，Met，Phe，Thr，2Val 由（b）可知N-末端是Ala 由（c）可知：胰蛋白酶作用于Arg,Lys的羧基端肽键，即此肽的Arg－Val 由（d）溴化氰作用于Met的羧基端肽键，并使之转化为高丝氨酸内酯， 则推测此肽中有段Met－Leu 综合以上推测此肽的氨基酸序列为：;习 题 2： 一个抗菌素多肽经酸完全水解后得知含有Leu， Phe，Pro，Val 和Lys，并以等分子存在；分子量 测得约1170；C-末端分析结果证明是阴性；FDNB 处理后的酸水解液中只生成DNP-ε-Lys ；用胰蛋白 酶水解后的产物经电泳和纸层析分离得到一个点。 用部分水解可产生下列一些二肽和三肽： （1）Leu－Phe；（2）Phe－Pro; （3）Lys －Leu （4）Phe－Pro－Val； （5）Val－ Lys； （6） Pro－Val－Lys； （7） Lys－Leu 。 试问此多肽的结构和氨基酸的排列顺序怎佯？;解析： 1、酸水解结果可知： 此肽含Leu，Phe，Pro，Val 和Lys 2、根据分子量可知： Leu，Phe，Pro，Val 和Lys各2分子 3、C-末端阴性结果可知：无自由COOH，可能是环状分子 4、FDNB结果可知：是Lys的ε-NH3与FDNB反应，更证明 是环状结构 5、已知胰蛋白酶作用于Arg,Lys的羧基端肽键，其水解结果 可知：此??状结构可能是两端肽的重复。 6、根据部分水解，利用“重叠肽”方法推测可能结构是;氨 基 酸;氨 基 酸;氨 基 酸;表1 氨基酸的pK’和pI值（pH）