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hpa15 15基因多态性与深静脉血栓形成相关性的研究-study on the correlation between h pa15 gene polymorphism and deep venous thrombosis.docx

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hpa15 15基因多态性与深静脉血栓形成相关性的研究-study on the correlation between h pa15 gene polymorphism and deep venous thrombosis

HPA1-5,15 基因多态性与深静脉血栓形成相关性的研究外科学 研究生 王庭钊,导师 马思星摘要:目的 通过检测深静脉血栓形成组及对照组的人类血小板抗原HPA1-5,15 基因型和基因频率,探讨其基因多态性与深静脉血栓形成的相关性。方法 外周 血基因组DNA提取(采用酚-氯仿方法),序列特异性引物-多聚酶链反应技术,扩 增目的基因,对HPA基因进行分型。HPA基因频率群体分布采用Hardy-Weinberg 平衡检验,实验组和对照组频数差异比较采用χ2检验。结果 (1)DVT组与对照 组实际基因型分布与理论基因型分布均无统计学显著性差异(P0.05),符合 Hardy-Weinberg平衡定律,具有人群代表性;(2)比较对照组,深静脉血栓形成 组6个基因多态性无统计学意义(P0.05) 结论:HPA1-5,15基因多态性不是深 静脉血栓形成的危险因素,与深静脉血栓形成无明显关系。关键词:人类血小板抗原,基因多态性,深静脉血栓形成,危险因素缩略词表英文简称英文全称中文名称DVTAMIDeep Vein Thrombosisacute myocardial infarction深静脉血栓形成 急性心肌梗死GPplatelet glycoprotein血小板膜糖蛋白HPAHuman platelet alloantigen人类血小板抗原SNPssingle nucleotide polymorphisms单核苷酸多态性DNAdeoxyribonuleic acid脱氧核糖核酸SSPsequence-sepcific primers序列特异性引物PCRpolymerase chain reaction多聚酶链反应EDTAeditic acid乙二胺四乙酸SDSSodium Lauryl Sulfate十二烷基硫酸钠EBethidium bromide溴化乙锭1.前言:深静脉血栓形成(Deep Vein Thrombosis DVT )是指血液在深静脉不正常 的凝结。该病是血管外科常见病之一,治疗不及时或治疗方法不当常留有后遗症, 造成生活质量下降,甚至劳动力丧失,因此早期防治深静脉血栓形成已是当务之 急。目前认为【1】导致深静脉血栓形成与 3 种因素有关:①静脉内膜损伤:静脉 壁因外伤如手术、创伤或感染等是内膜遭到破坏,内膜下的胶原裸露,导致血小 板的黏附,并进一步发生聚集和释放反映,释放的生物活性物质可使血小板进一 步聚集,形成血小板血栓;②血流缓慢:静脉血流瘀滞增加了激活的血小板和凝 血因子与静脉壁接触时间,容易引起血栓形成;③血液高凝状态。抗凝系统的异 常,可导致体内生理性抗凝机制的损害,酿成血液高凝状态。另外由于先天性常 染色体显性遗传,造成的抗凝血酶 III、蛋白质 C 等的降低或活性异常,称为“原 发性血液高凝综合征”,或称“遗传性血栓综合征”。血小板活化与血小板膜糖蛋 白相关,血小板膜糖蛋白的表达和功能受其基因多态性的影响,所以本研究探讨 人类血小板抗原(Human platelet alloantigenHPA)基因多态性是否为 DVT 的遗传背 景之一。本研究采用 序列特异性引物 - 多 聚 酶 链 反 应 ( sequence-sepcific primers–polymerase chain reaction PCR-SSP)技术【2】,将 HPA1-5,15 系统在 同一条件下进行同步扩增,采用病例对照的研究方法,探讨 6 组基因多态性与 DVT 发病的相关性。分析 HPA 是否为 DVT 发病的危险因素,以利于临床对该病的 遗传性高危人群做出早期识别,达到预防的目的。2.对象与方法2.1 研究对象及标准病例组:2010 年 12 月至 2011 年 12 月在贵阳医学院附属医院血管外科住院初发深静脉血栓形成患者 40 例,汉族人,其中男 15 例,女 25 例,所有的病例 均符合多普勒血管超声提示、下肢深静脉造影检查明确诊断为 DVT 的患者(左下 肢 33 例,右下肢 4 例,双下肢 2 例,右上肢 1 例,肢体肿胀发生时间 2~14 天,周围型 15 例,混合型 8 例,中央型 17 例);年龄 21-83 岁,平均年龄 51.6±17.466 岁。主要症状:患侧肢体不同程度水肿,疼痛,局部皮肤颜色变化,活动受 限或者活动后症状加重,患肢周径增粗。对照组:同期在本院门诊健康体检者 40 例,汉族人,其中男 15 例,女 25例,年龄 21-70 岁,平均年龄 54.33±15.559 岁,与 DVT 组性别、年龄匹配 (PO.05)。2.2 仪器设备与试剂2.2.1 主要仪器设备9700 PCR扩增仪(基景(天津)模塑制品有限公司);TD5M低速多管架自动平衡 离心机(长沙迈佳森仪器设备有限公司);TG

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