hpa1 6 15基因多态性与血小板输注疗效相关性研究-study on the correlation between hpa 1615 gene polymorphism and platelet transfusion efficacy.docx

HPA1-6，15 基因多态性与血小板输注疗效相关性研究内科血液病学研究生（苗菁），导师（曾小菁）摘要： 目的 通过检测人类血小板抗原 1～6,15 系统(human platelet alloantigen ,HPA-1～6,15)，探讨 HPA 多态性与血小板输注疗效的相关性。方 法 (1)收集 30 例输注 2 次以上血小板的急性白血病患者外周血标本，根据血小 板回收率（percentage platelet recovery, PPR)判定输注效果;(2)采用酚／ 氯仿方法提取 DNA;(3)采用聚合酶链反应-序列特异性引物（polymerase chain reaction-sequence specific primers, PCR-SSP）方法在相同条件下对血小 板抗原 HPA-1～6,15 进行基因分型，分析 HPA 抗原与血小板输注疗效的关系。 结果 （1）HPA-1～3, HPA-5～6，HPA-15 系统等位基因呈多态性分布；HPA-4 呈 aa 纯合子单态性分布， HPA-1、5、6 基因以 aa 纯合子为主，仅 HPA-3、15见 bb 纯合子，b 等位基因频率以 HPA-2 最高（0.65），其次依次为 HPA-10.349），HPA-3（0.3）。（2）30 例急性白血病患者中有 21 例血小板输注无效，无效率为70%，多集中于输注 3 次及以上组。结论1. 抗-HPA 引起血小板输注无效几率 较小，主要发生在 HPA- 2、3、15 系统，对需作 HPA 配型的患者只要针对此 3 个系统进行检测，就可提高输注效果。2.临床应注重血小板输注治疗的个体化， 减少输注次数，提高输注疗效。关键词：血小板输注；疗效；急性白血病；血小板特异抗原，基因多态性前言：血小板输注临床用于预防和治疗血小板减少或血小板功能缺陷引起的出血， 恢复维持人体正常的止血和凝血功能。随着输血医学的不断发展，成分输血的推 广使用，血小板输注已成为临床输血治疗疾病的重要手段之一。但部分患者在输 注血小板后出血症状仍无改善，血小板计数水平仍旧很低。只要2次及2次以上给 予足量血小板，血小板增值未达预期值，即可定义为血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness, PTR) [1]。近年来随着血小板输注的日益增加，PTR成为制约临床治疗的一大难题。引起PTR原因分有免疫性和非免疫性两类。在临床血小板输注过程中，如果血小板同种抗原不合．可导致机体产生血小板同种抗 体，引起PTR。人类血小板抗原系统(human platelet alloantigen ,HPA)为血小 板特有，具有独特的遗传多态性，可介导同种免疫性抗体的产生。为了研究血小 板基因遗传多态性在血小板输注疗效的影响，我们用病例对照的研究方法，应用 聚合酶链反应一序列特异性引物(polymerase chainreaction—sequence specific primer，PCR-SSP)技术，选取急性白血病患者和正常对照，对HPA1-6,15 系统在同一扩增条件下进行同步扩增，探讨HPA1-6,15基因多态性与血小板输注 疗效的关系。1.材料和方法1.1 研究对象考虑急性白血病为临床接受血小板输注最多的人群，选取30例急性白血 病患者为研究对象，为2010年11月至2011年2月在贵阳医学院附属医院血液科 住院患者。其中急性淋巴细胞白血病4例,急性髓细胞白血病26例,均符合各型 急性白血病诊断标准[2]，男17例，女13例，年龄12-63岁，平均年龄43±7.31 岁。输注所用血小板悬液均由贵州省血液中心提供。制剂悬液均达到国家质量 标准。机采1个治疗量单采血小板为200～250 ml，含血小板数≥2．5×1011； 手工制备血小板1U由200ml全血分离25～30ml, 含血小板数2．5×1010,输入 10U相当于机采血小板1个治疗量[1]。1.2 血小板输注指征及用法血小板输注指征：入选患者化疗后血小板＜10 ×109/ L或≥10 ×109/ L 但伴感染发热或有出血倾向时输注血小板[3],每次输注浓缩血小板10U 或单 采血小板一个治疗量。1.3 血小板输注效果评价血小板输注效果评价用血小板回收率 PPR(percentage plateletrecovery)来评价,公式如下： PPR=[(输注后血小板计数一输注前血小板计数)(109／L) ×血容量（L）÷输注血小板数目(*1011 个)] ×100﹪ 。 血容量（L）=体重（kg）×70ml。输注后 24hPPR＞20 %即判断为输注血小板有效［1］。1.4 标本采集抽取清晨空腹外周静脉血 2ml 为标本，EDTA 抗凝充分混匀，采集后 1h 内将标本在室温下以 3