igf1对脂肪变肝细胞p38mapk表达和生化指标的影响-effects of i gf1 on expression and biochemical indicators of p 38 mapk in adipocytes.docx

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日IGF-1对脂肪变肝细胞p38MAPK表达和生化指标的影响摘要目的：研究IGF-1对油酸诱导的脂肪变肝细胞p38MAPK表达及其生化指标的影响，旨在探讨IGF-1在非酒精性脂肪性肝病中的作用，进而为NAFLD的临床防治提供新思路。方法：人肝癌细胞株HepG2，用含10%的胎牛血清的DMEM培养基培养。然后以不同浓度油酸诱导HepG2细胞发生脂肪变性，采用MTT法探索最佳造模浓度。进行所有实验之前，均将HepG2细胞置于无血清DMEM培养基中培养12h。将HepG2细胞随机分为3组：正常对照组、油酸诱导组、油酸联合IGF-1组。采用油红O染色观察各组细胞内脂质沉积情况；WesternBlot检测各组p38MAPK、p-p38MAPK蛋白的表达；采用生化试剂盒检测各组细胞内TG（甘油三酯）及上清液中ALT、AST的水平。结果：1、油酸对HepG2细胞株具有诱导作用，使其发生一定程度的脂肪变性，并可顺利构建肝细胞脂肪变模型。在油红O染色之后，通过光学显微镜进行观察，结果显示肝细胞脂质沉积并没有出现于正常对照组中；油酸诱导组在培养24h后可见细胞内少量脂质沉积，脂变率（10.37±1.79）%；随着培养时间的增加，脂肪变程度逐渐加重，48h后脂质沉积增多，脂变率（34.26±7.04）%；72h后则出现大量脂质沉积，脂变率（75.63±12.03）%。通过对上述3个培养时点的对比，差异具有统计学意义（P0.01）。油酸联合IGF-1组与油酸诱导组相比，培养24h后其脂变率无明显差异（P0.05），48h、72h后油酸联合IGF-1组的脂变率明显降低，分别为（28.76±7.12）%、（37.67±6.89）%，差异分别具有统计学意义I（P0.05）。2、各组脂肪变肝细胞内TG水平的比较随着培养时间的增加，油酸诱导组、油酸联合IGF-1组细胞内TG含量均有所增高，油酸诱导组内各时点进行比较具有显著的统计学差异（P0.01）。油酸联合IGF-1组和油酸诱导组各时点的TG含量明显多于正常对照组，此差异比较明显，具有显著的统计学意义（P0.01）。油酸联合IGF-1组细胞在经过48h、72h培养之后，细胞内的TG含量明显低于油酸诱导组，此差异比较明显，具有显著的统计学意义（P0.05）。3、各组培养上清液中ALT、AST含量的比较随着培养时间的增加，油酸诱导组、油酸联合IGF-1组细胞上清液中的AST和ALT的含量明显增加，在油酸诱导组中各时点之间的差异比较明显，具有显著的统计学意义（P0.01）。油酸联合IGF-1组细胞在经过48h、72h培养之后，细胞上清液中ALT、AST含量明显低于油酸诱导组，此差异比较明显，具有显著的统计学意义（P0.01）。4、各组细胞p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表达水平的比较各组细胞分别培养24小时、48小时和72小时之后，p38MAPK蛋白表达都比较明显，但是各组之间的差异不明显，不具有统计学意义（P0.05）。油酸联合IGF-1组以及油酸诱导组p-p38MAPK均有表达，正常对照组无表达。油酸诱导组72h时p-p38MAPK蛋白表达与24h、48h相比明显增高（P0.01）；油酸联合IGF-1组内各时点进行比较，差异无统计学意义（P0.05），然而与油酸诱导组培养72h后p-p38MAPK的蛋白表达（2.93±0.13）相比较，油酸联合IGF-1组表达水平却显著降低（1.12±0.07），差异具有统计学意义（P0.01）。结论：IGF-1可以改善肝细胞脂肪变的程度，明显降低肪变肝细胞p-p38MAPK蛋白的表达水平，改善脂肪变肝细胞的生化指标，提示IGF-1可能通过p38MAPK信号通路参与肝细胞脂肪变的调节，在非酒精性脂肪性肝病的发生发展过程中发挥着重要作用。关键词：非酒精性脂肪性肝病；胰岛素样生长因子-1；油酸；肝细