il1基因多态性与胃癌的关联性研究及功能 验证-association study and functional verification of il1 gene polymorphism with gastric cancer.docx

万方数据 万方数据 本课题受国家自然科学基金项目资助： “炎症相关 miRNA 及其靶序列 SNPs 与胃癌发生的分子流 行病学研究”（No. 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者（签名）： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者（签名）： 年 月 日 摘要 摘要 摘要 全世界范围内，胃癌仍然是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，近年来 其发病率呈现明显的上升趋势且呈现年轻化趋势，严重威胁居民的身心健康。 胃癌的发生发展是一个多步骤、多因素、多阶段及多种机制共同作用的结果， 包括基因因素，生物因素以及多种环境危险因素。流行病学研究结果显示炎症 反应，细胞因子以及免疫介质参与到了胃癌的发生发展过程中，参与其中的炎 性细胞因子，尤其是IL-1家族，可以显著地影响胃癌的易感性。 目的 研究IL-1家族基因（IL-1A rs2856836，IL-1R1 rs3732131，IL-1RN rs9005， IL-18RA rs1135354以及rs3771157）3’-UTR 区的单核苷酸多态性（SNPs）和胃癌 易感性的关系，为预防胃癌提供理论支持，进一步验证预测出的miRNA-miR-92a， 为IL-1家族基因相关miRNA在胃癌中的作用提供理论支持。 方法 1. 运用生物信息学网站及软件筛选IL-1家族基因3’-UTR内的miRNA靶序列 SNPs，预测其可能存在的结合位点。 2. 采用病例-对照的研究方法，收集500例医院来源且经病理学诊断确诊的 胃癌患者及按别及年龄进行频数匹配的社区来源的500例正常对照的血液样本， 采用聚合酶链性式反应-限制性片段长度分析法（PCR-RFLP）对IL-1A rs2856836， IL-1R1 rs3732131，IL-1RN rs9005，IL-18RA rs1135354以及rs3771157进行基因分 型。采用SPSS21.0软件包对病例组和对照组的一般特征、不同基因型、等位基因 的 分 布 差 异 进 行 统 计 分 析 ； Hardy-Weinberg 在 线 分 析 软 件 对 对 照 组 进 行 Hardy-Weinberg平衡分析；SHEsis在线软件进行单体型分析；MDR2.0软件进行 基因-环境交互作用的分析。 3. 采用qRT-PCR方法对miR-92a，miR-21和mRNA IL-1RN，PTEN的相对表 达量进行检测，Western-Blot方法对IL-1RN，PTEN蛋白的表达水平进行检测，以 此判断IL-1RN是否为miR-92a的靶基因，进一步探讨其在胃癌发生发展过程中的 调控机制。 结果 I 1. SNPs基因分析结果：IL-1RN rs9005位点SNP与胃癌密切相关。与GG纯合 基因型相比，GA杂合基因型 (OR调整: 1.36; 95%CI: 1.04-1.78)和AA纯合基因型 (OR调整: 1.71; 95%CI: 1.04-2.81)在调整混杂因素吸烟、饮酒及家族史后能显著增 加胃癌的发病风险；与G等位基因相比，A等位基因与胃癌的发病风险增加显著 相关(OR调整: 1.34; 95%CI: 1.09-1.64)； 2. 基因-环境因素的交互作用分析：具有吸烟史，肿瘤家族史以及携带有 IL-1RN rs9005 A等位基因的人群患胃癌的风险是对照人群的2.07倍； 3. qRT-PCR 结果 ： 在 SGC-7901 和 BGC-823 两 种 胃 癌 细 胞 中 ， miR-92a 及 miR-21 的 相 对 表 达 量 在 过 表 达 组 以 及 抑 制 剂 组 中 差 异 均 具 有 统 计 学 意 义 （P0.05）；在BGC-823胃癌细胞中，mRNA IL-1RN及mRNA PTEN的相对表达 量在过表达组中的差异具有统计学意义（P0.05），在SGC-7901胃癌细胞中， mRNA PTEN的相对表达