高级生化部分答案.doc

名词解释 酶的催化混杂性(Enzyme promiscuity）： 活性中心的催化三联体：催化三联体通常指在水解酶和转移酶的活性位点中心同时作用的三个氨基酸残基（如蛋白酶、酰胺酶、酯酶、酰基转移酶、脂肪酶和β-内酰胺酶）。用于共价催化的亲核残基一般是酸-碱-亲核三联体。体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。在基因组图谱和序列分析的基础上，对已知基因和基因的结构进行比较，了解基因的功能，表达调控机制和物种进化过程的学科。是参与非特异性免疫（天然免疫）的一类重要蛋白质分子，也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。TLR是单个的跨膜非催化性蛋白质，可以识别来源于微生物的具有保守结构的分子。当微生物突破机体的物理屏障，如皮肤、粘膜等时，TLR可以识别它们并激活机体产生免疫细胞应答。亦被称为蛋白质微阵列,它是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面形成微阵列, 根据蛋白质分子间特异性结合的原理, 构建微流体生物化学分析系统, 以实现对生物蛋白分子准确、快速、大信息量的检测, 是一种高通量、微型化和自动化的蛋白质分析技术. 简单地说, 就是一次试验中同时检测几百甚至几千种目标蛋白/多肽的分析技术。一个细胞或者生物体所携带的一套完整的单倍体序列，包括全套基因和间隔序列。亦称恶性肿瘤，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了生长失控外，还会局部侵入周遭正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。 又称“下一代”测序技术一次性对几百万到十亿条DNA分子进行并行测序是利用生物信息学方法和工具,对基因组所有基因的生物学功能进行高通量注释研究内容包括基因识别和基因功能注释两个方面。（1）发现问题 找到目标； （2）找到目标 探寻机制； （3）探寻机制 药物研发； （4）药物研发 临床实验。 请从组织差异性等不同层面阐述癌症的复杂性 转录因子在机体的先天免疫调控中起着重要的作用，请列举一种转录调控因子，解释其激活与相应的免疫作用分子如干扰素或细胞因子过量表达之间的关系 假设A病毒是一种双链DNA病毒，在侵染过程中，可以诱导干扰素及细胞因子的释放，从而引起机体的免疫应答反应。其在宿主体内的持续性感染可以导致机体免疫功能失调，并引起自身免疫系统的疾病。请举例说明人体有可能通过什么样的免疫调控机制来应对A病毒的侵染，并就其中的一种可能机制设计出相应的实验方案来证明你的假设 你要一个蛋白质的纯化实验。实验目的是分离一种参与柠檬酸循环有关的酶--即位于线粒体基质的柠檬酸合酶。请根据以下的步骤回答相应的问题。 实验步骤1：取20 kg新鲜的牛心脏，置于冰上，使用含0.2 mol/L蔗糖、pH为7.2的缓冲液，匀浆均质化。 问题（1）为什么要用心脏组织？并且为什么选用如此大量的组织？ 因为三羧酸循环是在线粒体中发生?，心肌运动消耗的能量最多，心肌细胞中的线粒体最多。因为酶在低温环境中不容易失活制备线粒体采用组织匀浆悬液介质中进行差速离心的方法。蛋白质分子在280nm波长处具有最大吸收峰是等电聚焦电泳和SDS的组合先进行等电聚胶电泳（按照pI）分离，然后再进行SDS（按照分子大小）分离SDS：SDS能与蛋白质分子结合，使其带上大量相同密度的负电荷，掩盖蛋白质原有的电荷差异，且使蛋白质分子呈棒状，长度与分子量成正比。电泳时分子量小的蛋白质迁移速度快，分子量大的慢，这样便可以将分子量不同的蛋白质分子分离开来。 凝胶过滤和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳这两种分离蛋白质的方法建筑在分子大小基础上，且两方法均采用交联的多聚物作为支持介质，为什么在凝胶过滤时相对分子质量小的蛋白质有较长的停留时间，而在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳时它又跑的最快？ 凝胶过滤（gel filtration，GF），利用某些凝胶对不同组分因分子大小不同而阻滞作用不同的差异而进行分离的一门层析技术，其作用机理类似于筛子，小分子蛋白质可以进入更小的多聚物孔隙中，而大分子蛋白质无法进入较小的孔隙，因此是大分子的蛋白质先被洗脱出来，而后是小分子。 SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。因此，在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同，这就消除了在