高效液相色谱具体应用与注意事项.ppt

高效液相色谱具体应用 及注意事项 高效液相色谱仪（示意图） 高效液相色谱仪（示意图） 高压梯度液相色谱仪 低压梯度液相色谱仪 吸液过滤器 溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器，从而影响泵的运行，尤其水溶液或磷酸盐缓冲液（PH=4～7）。 以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。 A：严格执行溶剂过滤。 B：勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液 C：如果应用许可，可在溶剂中加入0.0001---0.001mol/L的叠氮化钠. D: 避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。 吸液过滤器（堵塞后的处理） 洗涤时最好是在一定的反压力下用超声波清洗，顺序是：水→ A →异丙醇→氯访→异丙醇。 当堵塞物为酸性有机物时A为是甲醇+稀氨水； 当堵塞物为碱性有机物时A为是甲醇+稀磷酸 然后再用泵在大流量的条件下用水清洗 吸液过滤器（堵塞后的处理） 玻璃过滤头用35%硝酸浸泡1小时，不必使用超声波清洗。 金属颗粒，常用稀硝酸清洗（勿让酸与乙醇接触） 金属离子可用EDTA-2Na 清洗 在线脱气装置 在线脱气装置是安装在流动相容器和泵之间，通过渗气膜把溶液中的体积较小的氧和氮分子抽出。 优点： 1 即使流动相是混合溶剂，也不会以分馏的形式改变流动相的组成。 2 成本低。 3 容易掌握使用。 在线脱气装置 缺点： 脱气能力受流量的制约。脱气能力随流量增加而降低，例如以甲醇作流动相，在210nm检测时，吸收将随流量增加而增加。 在线脱气装置(注意) 清洗在线脱气机及比例阀，尤其是长期使用水相或缓冲盐的通路，使用纯水冲洗后，再使用甲醇冲洗，可以打开Purge阀，使用5ml/min的流速。污染比较严重时，可以使用IPA清洗。 在线脱气机不用的通道，要充满溶剂或密封起来。 手动进样器（构造） 在LOAD位置时，样品装入定量环中。 手柄转60°时，由LOAD切换INJECT。 在INJECT位置上流动相在定量环中流动，样品进入色谱柱。 手动进样器（操作顺序） ------全量注入法 ① 将手柄搬到LOAD位置，将平头针注射器插入至进样阀底部。 ② 注入注射器内的样品。 ③ 切到INJECT位置，样品进入色谱柱。 ④ 在INJECT状态下不要立即拔出注射器。 （全量注入时，注射液抽取量应不少于定量环容积的5倍）。 手动进样器（操作顺序） ------部分注入法 ①把手柄置于INJECT位置，用针口清洗器，清洗针口（一般用流动相）。 （或把手柄置于INJECT位置，插入装载样品溶液的注射器）。 ② 将手柄搬到LOAD位置，注入注射器内的样品。 ③ 切到INJECT位置。 ④ 在INJECT状态下不要立即拔出注射器。 （括号中的方法与前面方法不同之处在于：是在INJECT插入注射器，将残留的样品从5#口排出，而不进入定量环,减少交叉污染）。 手动进样器（操作顺序） ------部分注入法 如果注射器的针尖有样品粘附，或针尖与定子之间有间隙，将有样品残留（图1 ）。 如此状态下进行拔出注射器时，将残留样品扩散到整个针口（图2） 。直接进样，则将残留样品推入定量环中（图3 ），产生交叉污染，在高灵敏度的检测器上可能出现怪峰。 手动进样器（注意事项） 进样阀切换到进样位置（Inject）后，要在此位置保持一段时间，使流动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。 冲洗需要的流动相体积至少为所进样品体积的10倍。例如，如果取20μL样品至定量管中，而流动相此时的流速为1mL/min，则需要在进样位置至少保持12s，即： 20μL×10× 60s/1000μL=12s。 手动进样器（注意事项） 使用标准注射器（针头长度：50.8mm(2in),外径：0.71mm(0.28in),前端：90°）长度不够