核磁共振基本方法解析蛋白质结构 酶工程与蛋白质工程 .pptVIP

NOESY 1H共振的分布 异核二维谱 多维谱 多维NMR解析蛋白质结构 自旋体系认证 序列认证 结构约束的收集 由核磁数据构建蛋白质溶液三维结构 用于NMR结构计算的约束 NOE—5? 化学位移—二级结构 偶极常数—二面角 氢氘交换—氢键 顺磁驰豫增强(PRE)—远距离（30?） 残余偶极耦合(RDC)—空间定向 化学位移与二级结构 偶极耦合与二面角 * 核磁共振方法解析蛋白质结构 核磁共振是解析蛋白质结构的一种重要方法 优点：不需结晶；可研究动力学。 缺点：受分子量限制，需要标记。 核磁共振的原理 自旋（I） 原子序数和原子质量都为偶数：I=0(12C, 16O) 原子序数为奇数，原子质量为偶数： I=整数(14N, 2H, 10B) 原子质量为奇数： I=半整数(1H, 13C, 15N, 31P) 自旋状态（M） M =I,(I-1),(I-2),…,-I 对于1H, 13C, 15N, 31P 来说: M =1/2,-1/2 凡自旋不为零的原子核，在外加静磁场中发生能级裂分，共振吸收另一特定频率的射频电磁场能量的现象，即为核磁共振。 Bo = 0 Bo 0 ΔE = γh Bo / 2π=h υ a b γ为磁旋比，由核的性质所决定。 1H谱 天然丰度高；灵敏度高。 13C谱 天然丰度低；灵敏度低；化学位移拓展宽、分辨率好 15N谱 天然丰度低；灵敏度低；化学位移拓展宽、分辨率好 核磁共振的频率 ΔE=γh Bo / 2π υ=γ Bo / 2π ΔE=h υ 在常用磁体（ 2.35 - 18.6 T ）下， 1H 的共振频率在100-800MHz范围，13C为它的1/4，15N为它的1/10。 10-10 10-8 10-6 10-4 10-2 100 102 wavelength (cm) g-rays x-rays UV VIS IR m-wave radio 进动(larmor)频率 ω = 2πν ? ω0 = γ B0 核磁共振的主要参数 化学位移 耦合常数 峰强 核欧佛豪斯效应（NOE） 横向驰豫时间 纵向驰豫时间 线宽 化学位移 不同的原子处于不同的化学环境，即处于不同的电磁环境,因此表现出不同的共振频率： υ=γ（Bo±B）/2π ω=2πυ=γ(Bo±B) 逆磁屏蔽 微磁环境 Beff=B0-Bloc--- Beff =B0(1-σ) 化学位移的表示方法 影响化学位移的效应： 环流位移效应 环状分子的大π电子云产生的附加磁场对样品核的影响 顺磁离子效应 金属离子对周围核的影响 pH滴定效应 不同pH下各基团解离情况的不同对化学位移的影响 耦合常数 自旋耦合 共价键（1-4个键）相连核之间的特性张量的相互作用 1 3 C 1 H 1 H 1 H one-bond three-bond 自旋裂分 由于被测核与相邻核自旋耦合引起的谱线裂分， 裂分的大小称为耦合常数 aa ab ba bb I S S S I I J (Hz) 耦合常数不随磁场的变化而变化 两核耦合引起对方谱线裂分的大小相等 相距越远、所隔键数越多，耦合越弱 重原子比轻原子耦合强 耦合常数的大小与耦合核的二面角有关 峰强、驰豫和线宽 峰强与共振粒子数成正比。 纵向驰豫是高能原子核将其多余能量交给周围介质而返回低能态的过程。 横向驰豫是由于磁场不均等因素引起的磁化矢量的相移。 由于磁场的不均一，会导致谱线增宽。线宽为横向驰豫时间的倒数。分子翻滚速率、溶液粘度和分子内部运动性等影响线宽。 NOE 不同核之间通过空间的偶极相互作用，其强度与核间距的六次方成反比。 若用射频照射核A，其谱峰被抑制，与其空间靠近的另一核B的谱峰会略有增强，其增强的程度，即为NOE强弱的度量。 因NOE的强度与核间距有关，所以是分子结构中的最重要参数。 一维谱 共振峰强度随频率变化