放线菌的分离.doc

实验： 实验学时：学时 实验类型：实验实验要求：必修 一、实验目的 掌握 二、实验内容 三、实验原理、方法和手段 四、实验组织运行要求 根据本实验的特点、要求和具体条件，采用采用集中授课形式，分组试验进行的组织运行模式。 五、实验条件 试剂与仪器 试剂：可溶性淀粉KNO3、K2HPO4·3H2O、NaCl、FeSO4·7H2O、MgSO4·7H2O、琼脂仪器：高氏1号合成培养基：可溶性淀粉20 g，KNO3 1.0 g，K2HPO4·3H2O 0.5 g，NaCl 0.5 g，FeSO4·7H2O 0.01 g， MgSO4·7H2O 0.5 g，琼脂20 g，水1000 mL，分装，高压灭菌 六、实验步骤每处理随机取 g，自然条件下风干，颜色由深变浅后碾碎，过孔径为840 μm（20目）的土壤筛 称取待测样品10.0 g，放入装有90 mL无菌水的250 mL三角瓶中，振荡10 min，即配成10-1稀释度液；稀释10-1的土壤悬浮液于装有9mL无菌水的试管中，充分振荡即配成10-稀释配成10-，10-稀释度用平板表面成菌落法测定土壤中微生物数量将配好不同稀释度10-2，10-3，10-4）的菌悬液，用吸取0. mL土壤悬液接种在不同的稀释度编号的平板上，每个处理重复次，用无菌刮铲将菌液在平板上均匀涂开，每个稀释用一个刮铲将涂好的平板置于台面上20～30 min，使菌液充分渗透于培养内，然后将平板倒放，置于28 条件下恒温培养至长出菌落开始计数七、实验结果与记录 （称取待测样品10.0 g （配好不同稀释度10-2，10-3，10-4）的菌悬液 （平板倒放 （添加重铬酸钾溶液培养基菌落生长情况） 实验数据处理： 无添加重铬酸钾溶液: 10-2 10-3 10-4 有添加重铬酸钾溶液: 10-2 10-3 10-4 原始数据： 菌液稀释度 放线菌数量/个(无重铬酸钾) 放线菌数量/个(有重铬酸钾) 10-2 300 152 10-3 112 67 10-4 20 8 土壤中（湿重）放线菌的数量的计算：由原始数据知稀释度为10-4和10-3时放线菌的数量大致呈10倍关系，与理论相符。所以取稀释度为10-4和10-3两者的平均值计算土壤中（湿重）放线菌的数量为宜。计算如下， 无重铬酸钾：[(20*104/10)+(112*103/10)]/2=15600个/g 有重铬酸钾：[(8*104/10)+(67*103/10)]/2=7250个/g 八、思考题好气性，有少数是和某些植物共生的，也有是寄生菌，可致病，寄生菌一般是厌气菌。放线菌有一种土霉味，使水和食物变味，有的放线菌也能和霉菌一样使棉毛制品或纸张霉变。 放线菌在培养基中形成的菌落比较牢固，长出孢子后，菌落有各种颜色的粉状外表，和细菌的菌落不同，但不能扩散性的向外生长，和霉菌的也不同。放线菌有菌丝，菌丝直径有1μ，和细菌的宽度相似，但菌丝内没有横隔，和霉菌又不同。一般地，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。通常，随着地理分布、植被及土壤性质的不同，放线菌的种类、数量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本营，其中的放线菌多以链霉菌为主，因此人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌土壤放线菌是指在形态学特征上是细菌和真菌间过渡的单细胞微生物。具有直径0.5-0.8μm呈分枝状的菌丝。典型丝状放线菌主要属于链霉菌属（Strephomyces）和小单孢菌属（Micromonospora）两类。均属好气性异养型，能够广泛利用纤维素、半纤维素、蛋白质、木质素等含碳和含氮化合物。最适pH6.8-7.5，最适温度25-30。农田土壤中检出的放线菌主要是链霉菌属。放线菌的菌落质地致密，表面呈紧密的绒状，或坚实、干燥而多皱。由于基内菌丝长在培养基内，所以菌落与培养基结合较紧，不容易被挑起，或者被挑起后不容易破碎。当孢子丝形成大量孢子布满菌落表面时，使菌落呈絮状、粉末状或颗粒状，而与细菌菌落判然有别。此外，如用放大镜仔细观察，可以看见菌落周围有放射状菌丝。 　　放线菌主要通过形成无性孢子的方式进行繁殖。其孢子丝成熟时，分化形成许多孢子，称为分生孢子。分生孢子常具色素，呈白、灰、黄、橙黄、红、蓝、绿等颜色。 　　孢子丝形成孢子的方式有凝聚分裂和横隔分裂两种。大多数放线菌按凝聚分裂方式形成孢子，其过程是在孢子丝内从顶端到基部，细