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微量肉汤稀释法 微量肉汤稀释法结果读取技巧 磺胺类药物容易出现弱生长，只要满足70%以上抑菌率即可视为未生长 真菌药敏三唑类药物容易出现拖尾现象（即低浓度孔易出现弱生长），判读时以对照孔为参照，＞80%的抑菌率即可视为未生长 大于三孔不同梯度浓度的抗生素测试中，出现的高浓度生长，而低浓度不生长现象叫跳孔。造成跳孔的主要原因，菌悬液乳化不充分，细菌分散不足，以及药敏卡某些孔被污染 跳孔的解决方法：根据其他药理学特征类似的抗生素的敏感性以及分析其他同类不同种抗生素的敏感性进行推断性修正 修正低浓度——耐药 修正高浓度——敏感 肉汤稀释法注意事项 生长缓慢微生物（形成肉眼可见生长＞1周）不适合用MIC法 在肉汤中发育不良的微生物不适合用MIC 粘液性铜绿假单胞菌——只能用扩散法，48小时观察结果 淋病奈瑟菌——CLSI无肉汤稀释法药敏指南 注意微弱生长导致的假敏感（结果需要修正） 例如铜绿对磺胺、四环素、头孢噻肟/曲松 鲍曼不动杆菌对氨曲南 肺克、阴沟、变形杆菌对呋喃妥因 稀释法药敏影响因素 培养基 pH值 7.2-7.4 营养程度 抗生素拮抗剂含量 钙镁离子含量（钙10-25；镁10-12.5μg/ml） 菌悬液（5×104CFU/ml） 接种效应 浓度高MIC抬高 浓度低MIC压低 细菌纯度 气体环境 所有需氧细菌均放普通大气环境。如果放CO2，由于碳酸的影响，药物活性受到影响，形成假敏感或假耐药 培养时间 真菌需48小时 奴卡菌需5天 E-test法 MIC 值标注于试条的光面 Etest 试条 毛面贴于MHA上 Etest 操作程序 按照扩散法标准操作涂布接种 贴上试条并培养15-18小时 读取抑菌浓度并按标准解释  肺炎链球菌青霉素 MIC = 3 ?g/ml 结果读取 药敏试验结果控制 药敏试验结果解释标准 CLSI标准； 全球性 每年更新 非强制性学术机构 FDA标准（全球标准） 建立在CLSI基础上 6~8年更新一次 官方机构，标准带有强制性 法国CASFM标准； 梅里埃产品习惯采用的CLSI以外的标准 英国BSAC标准； 欧洲应用比较广泛的标准 欧洲EUCAST标准 …….. CLSI药敏解释标准 CLSI (Clinical Laboratory standard institution)药敏指南 CLSI 药敏文件 M100-S22 常见菌 (2012)** M11-A7 厌氧菌 (2007) M39-A3 积累抗菌谱(2009) M24-A 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放线菌 M27-A2 酵母样真菌MIC法(2002) M44-A 真菌纸片扩散法(2004) M45-A 低频分离菌与苛养菌(2006) * M100 updated yearly CLSI M100-S22 解释标准覆盖的细菌类别 肠杆菌科 铜绿假单胞菌 不动杆菌属 洋葱伯克霍尔德菌 嗜麦芽窄食单胞菌 其他非肠道杆菌 葡萄球菌属 肠球菌属 流感嗜血杆菌与副流感杆菌 淋病奈瑟菌 肺炎链球菌 Β-溶血链球菌 草绿色链球菌 脑膜炎奈瑟菌 厌氧菌 不同细菌适用的药敏方法 部分细菌同时具有扩散法标准和MIC标准，但具有扩散法标准的药物相对较少 部分细菌（某些药物）只有MIC标准 其他非肠道细菌所有药物 葡萄球菌万古霉素、托达霉素 肠球菌托达霉素 肺链除苯唑西林以外的其他β内酰胺类 Β溶血链球菌除青霉素、氨苄青霉素、头孢吡肟、噻肟、曲松外的其他β内酰胺类 草绿色链球菌除头孢吡肟、噻肟、曲松外的其他β内酰胺类 厌氧菌所有药物 淋菌只有扩散法和琼脂稀释法，无肉汤稀释法标准 少见菌和苛养菌的特殊药敏 参考方法：M45-A 乏养菌与颗粒链菌——稀释法 嗜水气单胞菌复合群——稀释法与扩散法 弧菌属细菌（霍乱除外）——稀释法与扩散法 芽孢杆菌属（炭疽除外）——稀释法 空肠/大肠弯曲菌——稀释法与扩散法 棒状杆菌——稀释法（可用的药物标准比BSAC标准提供的多） Methods for Antimicrobial Dilution and Disk Susceptibility Testing of Infrequently Isolated or Fastidious Bacteria；Approved guideline 猪红斑丹毒似菌——稀释法 HACEK组苛养性G-杆菌——稀释法 卡他莫拉菌——稀释法 产单核细胞李斯特菌——稀释法 巴斯德菌——稀释法 其他，如乳杆菌、片球菌、无色藻菌——稀释法 分枝杆菌, 奴卡菌, 以及其他需氧放线菌药敏 参考方法：M24-A 结核分枝杆菌复合群——比例法 缓慢生长非结核分枝杆菌——稀释法 快速生长分枝杆菌——稀释法 奴卡菌等需氧放线菌——稀释法