抗丁香假单胞菌hrpa单链抗体制备-preparation of hrpa single chain antibody against pseudomonas syringae.docxVIP

下载本文档

6
0
约6.57万字
约 81页
2018-05-29 发布于上海
举报
版权申诉

抗丁香假单胞菌hrpa单链抗体制备-preparation of hrpa single chain antibody against pseudomonas syringae.docx

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

抗丁香假单胞菌hrpa单链抗体制备-preparation of hrpa single chain antibody against pseudomonas syringae

独创性声明本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位（毕业）论文作者亲笔签名：日期：论文使用授权的说明本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□不保密，本论文属于不保密。□学位（毕业）论文作者亲笔签名：日期：指导教师亲笔签名：日期：目录目录i摘要 IAbstract II英文缩写表III1 文献综述1引言11.1 丁香假单胞菌11.1.1 假单胞菌11.1.2 丁香假单胞菌21.2 Ⅲ型分泌系统 41.2.1 Ⅲ型分泌系统简介 41.2.2 Ⅲ型分泌系统与丁香假单胞菌 51.3 单链抗体技术61.3.1 抗体技术的发展 61.4 噬菌体展示技术81.5 植物抗体 91.6 本研究的目的及意义 102 材料与方法 112.1 实验材料 112.1.1 菌株及载体112.1.2 PCR 引物112.1.3 仪器设备132.1.4 材料与试剂142.1.5 主要试剂配方152.2 实验方法 18E.coli BL21/pGEX-6p-1-hrpA 载体的构建18E.coli DH5α/pET32a-hrpA 中质粒的提取18iPCR 引物序列合成 19扩增 hrpA 基因 19DNA 回收纯化 20hrpA 基因与载体的酶切 20hrpA 基因和载体的连接 21E.coli BL21 感受态细胞的制备 21pGEX-6p-1-hrpA 载体的转化 222.2.1.9 重组载体菌落 PCR 和酶切验证 222.2.1.10 重组载体的序列验证232.2.2 融合蛋白的诱导表达与纯化232.2.2.1 融合蛋白的诱导表达与分析 232.2.2.2 TRX-HrpA 融合蛋白的割胶纯化 242.2.3 抗 HrpA 单链抗体库的构建 252.2.3.1 小鼠血清效价的测定25小鼠脾脏 RNA 的提取 26PT-PCR 反转录合成 cDNA 27VH 基因和 VL 基因的扩增 28ScFv 的组装 29ScFv 基因与 pCANTAB-5E 载体的双酶切 30ScFv 基因与载体的连接 312.2.3.7 噬菌体单链抗体文库的构建 312.2.3.8 噬菌体单链抗体文库的 PCR 验证 322.2.4 抗 HrpA 单链抗体的初步鉴定 322.2.4.1 重组噬菌体的制备322.2.4.2 噬菌体单链抗体库的淘选 332.2.4.3 ELISA 筛选抗 HrpA 单链抗体 342.2.4.3 ELISA 检测抗 HrpA 单链抗体特异性 352.2.4.4 阳性克隆的定量分析352.2.4.5 单链抗体转植物载体的构建 353 结果与分析 393.1 E.coli BL21/pGEX-6p-1-hrpA 载体的构建393.1.1 hrpA 基因的 PCR 扩增393.1.2 pGEX-6p-1-hrpA 重组载体的 PCR 和酶切验证393.1.3 载体的测序结果分析413.2 融合蛋白的诱导表达与纯化413.2.1 pGEX-6p-1-hrpA 重组载体融合蛋白的诱导表达413.2.2 TRX-HrpA 融合蛋白的诱导表达与纯化423.2.3 蛋白浓度的测定 443.3 抗 HrpA 单链抗体库的构建453.3.1 小鼠血清效价测定453.3.2 小鼠脾脏 RNA 的提取463.3.3 VH 基因和 VL 基因的扩增473.3.4 ScFv 的组装493.3.5 噬菌体单链抗体库的构建与 PCR 验证493.4 抗 HrpA 单链抗体的初步鉴定503.4.1 噬菌体单链抗体库的淘选 50ELISA 筛选抗 HrpA 单链抗体51ELISA 检测抗 HrpA 单链抗体特异性523.4.4 阳性克隆的定量分析533.4.5 单链抗体转植物载体的构建 544 讨论564.1 融合蛋白表达载体 564.2 小鼠免疫 564.3 酶联免疫测定实验 574.4 RNA 的提取574.5 噬菌体单链抗体库的构建584.6 噬菌体单链抗体库的淘选584.7 抗 HrpA 单链抗体的鉴定595 结论60参考文献61附录 68致谢 71摘要丁香假单胞菌（Pseudomonas syringae）是一种革兰氏染色阴性细菌，其可使 40 多种植物致病，引发