雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞转移潜能影响-effect of rapamycin on metastatic potential of skin squamous cell carcinoma cells.docx

缩略词表(Abbreviation)英文缩写英文全名中文全名RAPArapamycin雷帕霉素OPNOsteopontin骨桥蛋白PBSphosphatebuffersaline磷酸盐缓冲液BSABovineserumalbumin牛血清白蛋白FBSFetalbovineserum胎牛血清PI3Kphosphoinositide3-kinase胞内磷脂酰肌醇AKT/PKBproteinkinaseB蛋白激酶BRT-PCRReversetranscriptase-polymerasechainreaction反转录酶-聚合酶链式反应mTORMammaliantargetofrapamycin哺乳动物RAPA靶蛋白PAGEPolyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PVDFPolyvinylidenedifluoride聚偏氟乙烯TBSTris-bufferedsalineTris缓冲液SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基硫酸钠TEMEDTetramethylethylenediamine四甲基乙二胺ODOpicaldensity光密度HEhematoxylinandeosin苏木素一伊红TrisTris(hydroxymethy)aminomethane三羟基甲基氨基甲烷ECLElectro-Chemi-Luminescence电化学发光EDTAS6K1eIF4E4EBP1Eta-1EthylenediaminetetraaceticacidRibosomalproteinS6kinase1eukaryoticinitiationfactor4EeIF4Ebindingprotein1EarlyT-lymphocyteactivation1乙二胺四乙酸核糖体蛋白S6激酶1真核起始因子4EeIF4E结合蛋白1早期T淋巴细胞活化1型FDKMAPEMTAMPKSCD-1FocaladhesionkinaseMitogenactivatedproteinkinaEpithelial-to-mesenchymaltransitionAdenosine5‘-monophosphate(AMP)-activatedproteinkinasstearoyl-CoAdesaturase1聚集粘附激酶有丝分裂原活化蛋白激酶上皮-间充质细胞转分化AMP依赖的蛋白激酶硬酯酰辅酶A趋饱和酶1雷帕霉素对皮肤鳞癌细胞转移潜能的影响摘要背景和目的雷帕霉素（Rapamycin，RAPA）是从吸水性链霉菌的发酵液中提取出来的一种新型大环内酯类免疫抑制剂。它可与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物RAPA靶体蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路下游分子蛋白mTOR特异性结合，从而阻断该信号通路对周围影响因子的刺激应答及传导。RAPA近年来一直是国内外的关注热点，许多研究已经发现RAPA有良好的抗肿瘤效果，包括乳腺癌、肺癌、肾癌、前列腺癌等，对肿瘤细胞的生长增殖有很强的抑制作用。最近国外更发现RAPA还可用于治疗阿尔茨海默病,但对皮肤上皮鳞癌细胞的作用鲜却有报道。皮肤上皮鳞状细胞癌（鳞癌）是皮肤表皮细胞的恶性肿瘤，又称为皮样癌，常见于50岁以上的老年人，高发于头皮，面部，口舌等处，尤其是皮肤与粘膜交界处。上皮鳞癌发展快，对组织破坏力强，具有很强的侵袭性和迁移性。临床治疗主要采用根治性切除手术，并联合术后放疗或化疗。但由于鳞癌细胞的高侵袭性和高迁移性，易发生复发和转移，因此临床上的预后不良。而皮样癌的发病机制目前尚不清楚，但有研究表明，可能由于Ras信号通路的激活，进而活化PI3K/AKT/mTOR信号通路，促进上皮细胞的过度增殖、迁移和脱（转）分化，同时导致了表皮屏障的增厚和功能障碍，甚至是表皮形成的失败。本研究旨在观察RAPA对于上皮鳞癌细胞的作用，观察细胞生物学行为上的变化，并对其作用机制进行初步探讨；为后续临床局部治疗皮肤鳞癌、预防癌细胞的局部侵润和迁移提供理论依据。方法1.实验分为Control（正常对照组）、RAPA处理组（5、10、20nmol·L-1）。2.通过噻唑蓝（MTT）试验检测不同浓度的RAPA（5，10，20nmol·L-1）对A431增殖情况的影响，并选出最适浓度。3.AnnexinV-FITC流式细胞技术检测RAPA对细胞的促凋亡作用。4.划痕实验和Transwellassay分别检测RAPA对细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。5.ReversetranscriptionPCR、Westernblot检测经药物处理前后细胞中OPN的表达情况。结果1.MTT实验结果显示不同浓度RAPA对A431增殖有抑制作用，且表现浓度依赖性。2.RAPA作用于A431细胞48h后，划痕实验及Tra