高分辨外周血染色体制备和羊水细胞培养.pptVIP

更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 高分辨外周血染色体制备及羊水细胞培养 检验科：陈美佳 进修初衷 提高自身专业理论水平和实验操作技能，学习先进的技术，开阔视野。 PREFACE 人外周血染色体制备 1 羊水染色体制备 2 阅片 3 日常理论知识的学习 4 体会 5 CONTENTS 6 致谢 人外周血染色体制备 1 制备原理 1. 正常情况下，人体外周血淋巴细胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞，使其恢复增殖能力。 2. 秋水仙素抑制细胞分裂，使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞，经低渗、固定、制片、染色后镜下观察进行核型分析。 外周血染色体制备 1 接种 收获 滴片 显带 两瓶培养基，每瓶培养基接种0.4ml外周血，于37°培养箱培养66-72h 秋水仙素、低渗、预固定，三次固定 每管悬液滴两张玻片，每张玻片头体尾各一滴，于60°烤箱烤22h 胰酶消化，小牛血清终止消化，吉姆萨染液染色 外周血染色体制备 1 制备的过程 合格的外周片 1. 每个低倍镜视野有5-7个分裂相 2. 染色体分裂相分散好，交叉少，染色体直，长度良好，显带后镜下观察桃红色，染色体带纹清晰可辨，背景清晰，无杂质或杂质少 外周血染色体制备 1 制备失败原因及对策 1.细胞培养基 2.接种 3.血源 4.秋水仙素 5.低渗时间 6.固定液比例 7.玻片质量 8.烤片 9.显带 10.染色时间 外周血染色体制备 1 关键点 关键点 关键点 关键点 无菌操作 标本核对 试剂配制 温湿度控制 注意事项 2 1 2 3 4 羊水染色体制备 2 收获 羊水细胞培养 1 细胞克隆出现小圆细胞 大量小圆细胞出现折光度好 出现贴壁细胞 换液 接种 观察 一般从第5天开始观察，出现贴壁细胞即可换液 接种培养 无菌抽取20ml的羊水，完全培养基接种，于CO2培养箱中培养 羊水细胞培养 1 收获时机 1.细胞的克隆数量 2.克隆中细胞密度 3.小圆细胞生长情况 收获 1.消化法 加秋-低渗-固定-滴片 2.原位法 加秋-低渗-固定-原位制片 羊水染色体制备 2 1.有足够分裂相中期 2.细胞密度适宜 3.染色体分布均匀 4.染色体形态清晰且直 5.镜下看不到细胞质 羊水染色体制备 2 理想羊水片 注意事项 1.培养瓶等器材保证无菌、干净、无毒 2.不使用过期或不合格的试剂 3.培养室定期进行空气消毒 4.操作过程保证无菌操作 5.正确配置和使用试剂 羊水染色体制备 2 优点 缺点 原位收获法 区分真假嵌合；收获时间缩短；收获过程中无羊水细胞的丢失及损伤。 收获过程中实验条件要求较高，尤其是对温度和湿度的控制很关键；不能上扫描系统，耗时耗力。 胰酶消化法 收获与制片条件要求不高，可以上扫描系统。 不能区分真假嵌合；收获过程中有细胞损伤与丢失。 阅片 3 掌握了核型分析的基本流程以及对常见异常染色体片的判读 了解病人的性别、年龄、临床诊断和检查结果等信息。 1 2 3 4 核型认真核对每一对染色体的条带。 计数20个核型，分析5个核型，出现性染色体数目异常或结构异常核型都要增加计数，翻倍计数至50个或100个，直至确定结果后才可停止。 结合其他检测结果发报告。 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP * 更多作品请搜索: /Wu2UP *