第四章 高效液相色谱 现代分离技术知识课件.ppt

３　疏水作用色谱的固定相 （１）经典疏水作用色谱的固定相 琼脂糖凝胶上接弱疏水基团 琼脂 OCH2CHCH2OR OH 甲基丙烯酸酯共聚物 （２）高效疏水作用色谱的固定相 排阻色谱的固定相进行改良 硅胶基质上键合 ４　影响疏水作用色谱的色谱条件 （１）　固定相的疏水性 （２）　离子强度 （３）　酸度 （４）　温度 八 高速逆流色谱法 高速逆流色谱（HSCCC）法是一类不用任何固体载体的液-液分配色谱方法，是根据组分在两液相中的分配系数的不同而分离，利用两相间的密度、界面张力等物理性质，完成组分在两相间的对流分配。 逆流色谱仪的发展可以追述到早期的分液漏斗，以及一系列的级联萃取装置（1941）、非连续式逆流分溶装置DCCD（1944）、紧凑型逆流分溶装置CCD（1958）、高效连续混合分层装置HECM（1960）、螺旋管行星式离心分离仪CPC（1966）、液滴逆流色谱仪DCCC（1970）、倾斜角转子逆流色谱仪ARCCC（1975）、高速逆流色谱仪HSCCC（1982）、正交轴螺旋管行星式离心分离仪（1989）等。 HSCCC是由恒流泵、进样器、柱系统、检测器、记录仪、收集器组成。GS-10A HSCCC的柱系统采用行星式高速运动的多层密绕螺旋管，当高速运动时，两相中的一相分布在多层柱管的近轴层，另一相分布在远轴的若干层，实现组分在两相中的高效分离。在HSCCC中两相的选择是实现成功分离的关键，应根据不同的样品选择两相的组成。如分离有机磷农药，采用CCl4-H2O（1:1）；分离沙棘总黄酮采用CCl4-MeOH-H2O（4:3:2）等。 HSCCC具有（1）柱的固定相容积高达80%，形成极稳定的对流分离；（2）可实现制备量mg-g级的分离纯化工作；（3）仪器低廉，运行成本低；（4）运行压力较低（10kg/cm2），流速快（1-4ml/min），易于操作等优点。 HSCCC可广泛应用于生物化学、药物、天然产物、环境等领域。例如 四环素碱、球红霉素、芦丁、槲皮素、柴胡皂甙等等。 第三节、液相色谱色谱化学键合固定相 液一固色谱法所使用的固定相 吸附活性的吸附剂 硅胶、氧化铝、高分子多孔微球及分子筛等 1. 液一固吸附色谱法固定相 活性炭属非极性吸附剂。在炭上有较强保留的是高折光指数的化合物，包括分子量较高的同系物、芳香化合物以及含氯、硫、溴、碘原子的分子。 液液色谱法的固定相 由载体与固定液构成 载体: 全多孔型或薄壳型 涂渍适当的固定液 化学键合固定相 2 液---液分配色谱法固定相 利用化学反应的方法通过化学键把各种不同的有机分子（固定液）键合到载体表面，这样制得的填料称化学键合相，简称键合相。其优点是： ①使用过程中固定液不遗失；②化学性能稳定，在pH2～8的溶液中不变质；③热稳定性好，一般在70℃以下稳定；④选择性好；⑤利于梯度洗脱。 3. 化学键合固定相 这类键合相表面键合的是极性很小的烃基，如十八烷基(C18）、辛烷基（C8）、甲基与苯基等。其中以十八烷基硅烷键合硅胶（或称ODS）应用最为广泛，在化学键合相中约占 80％。它适合分离非极性或极性小的试样。在应用中可选用极性较强的溶剂，如水。甲醇、乙醇或无机盐的缓冲液作流动相。 十八烷基键合相（ODS键合相）是将十八烷基氯硅烷试剂与硅胶表面的硅羟基，经多步反应生成ODS键合相。 4. 非极性键合相 晶体电阵计算:硅胶表面的硅羟基密度为8个/nm2。 化学法测定:5个/nm2， Si-OH + HO-R Si-OR + H2O 它的反应条件是在150-250度下反应3-8小时 HPLC早期的一种正相键合填料 Si-O-Si键型（硅胶与醇类物质反应） Si-OH + SOCl2 Si-Cl + SO2 + HCl Si-Cl +R-NH2 Si-NHR +HCl Si-N键型（硅胶与胺类物质反应） 商品牌号 官能团 粒度um 备注 Techsphere C22 Finepak sil C18 LiChrosorb RP-18 Nucleosil C18 Bondpark C18 Polygosil C18 Alltech C18 Zorbax C18 Partisil-ODS1 Partisil-ODS2 Partisil-ODS3 Superisorb-ODS Techsphere LiChrosorb RP-8 Polygosil C