反向遗传学在圆环病毒研究中的应用.docVIP

第五节 反向遗传学在圆环病毒研究中的应用 在众多的动物病毒性传染病中，圆环病毒病是一种不太引人注意的传染病，因为该病的感染过程比较长，且常与其他病原混合感染，容易混淆为其他疾病，所引起的直接经济损失也不是很高。因此，关于该类病原的基础研究相对比较少。近年来，随着人们对猪圆环病毒病关注程度的不断提高，国内、外一些学者开始重视对该类病原的研究。短短几年内，人们已在猪圆环病毒的基因组结构、基因功能、病毒致病性及毒力相关基因和基因疫苗等方面研究中都取得了显著进展。其中，反向遗传学技术发挥了重要作用，下面就对反向遗传学技术在圆环病毒研究中的应用作一简介。 一、在基因组结构与基因功能研究中的应用 Cheung[18]利用定点突变方法系统分析和研究PCV-2蛋白合成及DNA复制过程中所涉及的PCV-2的每个转录单位。结果表明，在CR的5端引入一个终止子不能影响Rep相关抗原或病毒DNA的合成，改变其他RNA的剪接位点附近的序列或者在NS0 RNA中引入终止子对病毒蛋白或DNA的复制也没有任何影响。然而，突变能产生截短的Rep或Rep蛋白，导致蛋白质的合成减少99％而且完全关闭DNA的复制，这些结果表明rep和rep是PCV-2复制所必需的基因，它们一起构成了PCV-2的功能性复制起始因子。 用PCV-1感染性克隆转染PKl5细胞12h后，对Rep、Rep两种转录本进行检测，发现其数量是类似的