实时荧光QPCR科普问答3.docVIP

实时荧光QPCR科普问答 问：什么是QPCR？ 答：QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称QPCR。 问：QPCR、DNA检测、PCR之间的关系？ 答：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction简称PCR）原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势，因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快，成为分子生物学诊断的主流，至今仍处于学术和应用前沿： 第一代产品： 基因扩增热循环仪（DNA Thermal Cycler）+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂，构成PCR定性检测。 第二代产品： 基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂，构成PCR-DNA终点法定量检测（End-point quantitative PCR detection），又分为终点酶免定量（　End-point ELISA-PCR）和终点荧光定量（End-point Fluor-PCR）两种。 第三代产品： 实时定量QPCR仪＋实时荧光定量试剂，构成QPCR-DAN/RNA实时荧光定量检测。 问：相比以前的方法，QPCR有哪些特点？ 答：QPCR至少有以下特点： 所用仪器少，只用一台仪器。 检测时间短，只须45分钟～1小时10分钟（试剂各异），而定性PCR须3～4小时，酶免终点定量须6～8小时，荧光终点定量须2～3小时。 操作极其简单：前处理后，样本插入仪器一小时后到电脑上来出报告即可，无须开盖，移样本（以前方法），避免污染。 结果精确：定性PCR只能定性，很粗略，终点定量PCR由于只能在40个热循环结束后检测荧光，被测荧光达到饱和导致定量不够精确，属于半定量状态。而实时荧光QPCR是在扩增的每时每刻连续检测各样本的荧光值的变化，如图一所示： 图一 西安天隆TL998A-III实际曲线1 检测动态范围：100～1010 DNA copies/ml 检测精度：0.1RLU 辨别率：5000和10,000个模板拷贝样本的辨别率99.7％。 问：QPCR的技术先进性、价格及应用现状？ 答：实时荧光QPCR是当今世界用于临床的最先进核酸分子诊断技术，被美国FDA承认并推崇，被美国FDA批准并取得临床应用执照的QPCR试剂品种有： HBV乙肝病毒DNA， HCV丙肝病毒RNA， HIV爱滋病病毒RNA， Chlamydi trachomatis（CT），性传播疾病，沙眼衣原体， Neiserria gonorrhea (NG)，性传播疾病，淋病巨细胞病毒结核分支杆菌淋病解脲支原体疱疹病毒巨细胞病毒 通过了SFDA的质量体系认证SARS）快速采样及定量分析评估系统”的研究。 2005年自然科学基金-----“基于ATP荧光和焦磷酸测序方法的有害微生物快速筛查及鉴定系统”，已申请，审批中。 2004年承担西安交通大学科研项目名称：生物污染微生物群荧光能量转换测量及快速分型方法和相关仪器研究，项目编号：DFXJTU2004-12。 图四 西安天隆公司QPCR检测仪批量生产与调试工作现场 西安天隆科技有限公司 地址：西安市火炬路4号5层 邮编：710043 电话: 02982228445 传真: 029E-mail: XATL@，XATL@ 网址: 西安天隆科技有限公司 R